[发明专利]源于尾叶桉CAD基因序列的RNAi片段及其应用

说明书

本发明提供一种源于尾叶桉CAD基因序列的RNAi片段及其应用，属于植物基因工程技术领域，将如SEQ ID NO.1所示的改良DNA序列，以“尾尾相连”的方式组成RNAi片段，其序列如SEQ ID NO.2所示。将该RNAi片段应用于转基因植株中，证明了该RNAi片段具有调控木质素合成的作用。本发明通过对尾叶桉CAD基因序列的研究，有助于推动尾叶桉转基因定向调控木质素合成的基因工程育种。

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一段源于尾叶桉CAD基因序列的RNAi片段的应用。

背景技术

桉树是桃金娘科桉属植物的总称，原产地为澳大利亚。广西的桉树研究在我国处于领先地位，20世纪70年代初期就开始引种，经过多年的引种试验及杂交选育，得到了多个优良树种、优良种源及优良家系。桉树生长快、材质好，广西全区桉树面积居全国首位，已经成为短周期原料林的主要造林树种。尾叶桉GLU4无性系(Eucalyptus urophylla cloneGLU4)是广西广泛种植的桉树良种，因其纤维素含量、纤维素长度等制浆指标显著优于其他桉树品种，成为纸浆材造林首选树种。从纸浆材生产需求出发，希望木材中的木质素含量更低所以定向调控木质素合成，成为纸浆材品质提升的主要研究策略。

CAD催化肉桂醇等几种木质素单体的直接前体合成，被认为是细胞木质化的标志。目前，已从多种植物中克隆了CAD基因，并利用一系列转基因方法(正义、反义等)对其功能进行了研究。在反义抑制CAD的杨树中，低水平CAD活性的植株木质部呈现红褐色，并且木质素更容易被分离，制浆效率提高。在抑制CAD活性的转基因苜宿中，木质素含量不受影响，但改变了S/G比值，表明CAD也参与了木质素单体的特异性合成。在玉米bml突变株中，CAD酶活性下降60％，木质素含量降低近80％。但至目前为止，在尾叶桉中尚未有CAD基因序列的报道，利用其中的基因序列进行基因工程调控尚未开展。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了源于尾叶桉CAD基因的RNAi片段，以及利用此RNAi片段构建得到的植物表达载体、宿主细胞等在植物木质素单体合成调控中的应用，有助于深入尾叶桉CAD基因功能的研究，以有效地定向调控木质素合成，在木质素合成调控的基因工程研究中的发挥重要作用。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

源于尾叶桉CAD基因序列的RNAi片段，是由一段源于尾叶桉CAD基因的改良的DNA序列以“尾尾相连”的方式组成；所述改良的DNA序列具有如SEQ ID NO.1所示DNA序列。

SEQ ID NO.1gaatttgccacagttacattcaccaggtcaagaattatcttggc

进一步地，所述RNAi片段的DNA序列如SEQ ID NO.2所示。

SEQ ID NO.2

gaatttgccacagttacattcaccaggtcaagaattatcttggc gccaagataattcttgacctggtgaatgtaactgtggcaaattc

本发明提供一种重组植物表达载体，包含所述的RNAi片段。

进一步地，所述重组植物表达载体是以pCAMBIA3301为基础，构建得到的重组载体pCAMBIA3301-S1。

本发明提供一种宿主细胞，包含所述的RNAi片段或所述的重组植物表达载体。

进一步地，所述宿主细胞为大肠杆菌、农杆菌或植物细胞。如大肠杆菌JM109菌株、农杆菌LBA4404菌株。

本发明提供一种源于尾叶桉CAD基因序列的RNAi片段的应用，是将所述的RNAi片段、所述的重组植物表达载体、或所述的宿主细胞应用于降低植物木质素合成中。