[发明专利]一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞CA199表达的试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞CA199表达的试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。所述的试剂盒，包括稀释液45mL、脱色液1mL、染色液A 0.5mL、染色液B 1mL、羊抗CA199一抗100μL、兔抗羊IgG/HRP 100μL、0.1%Triton X‑100 100μL、0.3% H₂O₂ 100μL、试剂A 15ml、试剂B 50ml、6×PBS缓冲液60mL。本发明的检测方法是利用膜过滤装置分离获得无法获取组织标本的晚期或复发胰腺癌患者外周血中的CTC，进一步运用免疫组化技术检测CTC的CA199表达情况。

技术领域

本发明涉及一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞CA199表达的试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。

背景技术

胰腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤，也是预后最差的恶性肿瘤之一，在恶性肿瘤所导致的死亡中，胰腺癌排第四位，90％患者在确诊后一年内死亡，5年生存率不足5％。由于胰腺癌早期症状隐匿，且没有特异性，侵袭性强，转移早，确诊时多处于中晚期，手术切除率低，确诊时候仅15％，因此对胰腺癌患者治疗方法的选定显得尤为重要，可以使部分患者避免不必要的手术创伤及风险。

CAl99(carbohydrate antigenl99)又称肿瘤相关199抗原、胃肠癌相关抗原或糖抗原，是一种黏蛋白类肿瘤标记物，系细胞膜上的糖脂质，在血液中以黏蛋白的形式存在。CAl99是一种与腺癌高度相关的抗原物质，由腺癌细胞产生，经胸导管引流入血。血清CAl99正常参考值为39kU／L，恶性肿瘤血清中CAl99浓度多明显升高，尤其是胰腺癌、结肠癌患者，升高几倍至几十倍不等，甚至可达1000U／mL，故主要用于胰腺癌的早期诊断，而目前临床实践中，胰腺癌患者CA199检测的标本主要为肿瘤组织，来源于手术或穿刺活检，很难做到多次或实时检测。

目前，山东省第一医科大学、山东省药物研究院联合山东祺欣生物科技有限公司、山东喻晓生物科技有限公司、济南杏恩生物科技有限公司、山东发现生物技术有限公司等单位，对于循环肿瘤细胞检测鉴定关键技术进行产业化推广的研究，本项目为山东省重大科技创新工程项目，本项目将以山东第一医科大学济南校区的山东省药物研究院为核心，落实注册人制度，依托循环肿瘤细胞检测鉴定核心诊断技术，进一步注册鉴定诊断试剂盒，以包括PD1、PD-L1、ER、PR、Her-2、GPC-3、VEGF、P53、Vimentin、TKI-EGFR、RAS、CK、ALK-D5F3、CD20、ALK/EML4、Beta-catenin、E-Cadherin、EP-CAM、HPV、IDH-1、PSA、PSMA、VEGF、GFAP、细胞角蛋白、AE1/AE3、雌激素受体、孕激素受体、BCA-225、CA 125、CEA、EMA、ERCC1、HPV、Ki-67、P53、TOP2A等作为CTCs表达的示踪剂，注册超灵敏、超快速、高覆盖、低成本、准确特异的鉴定诊断试剂盒，通过与在济南注册的山东祺欣生物科技有限公司、山东喻晓生物科技有限公司、济南杏恩生物科技有限公司、山东发现生物技术有限公司合作进行产业化推广。

发明内容

为了克服多次或实时检测的问题，同时避免穿刺活检面临出血、胰瘘、感染等风险，本发明提供了一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞CA199表达的试剂盒及检测方法，利用膜过滤装置分离获得无法获取组织标本的晚期或复发胰腺癌患者外周血中的CTC，进一步运用免疫组化技术检测CTC的CA199表达情况。

本发明采用的技术方案如下：

一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞CA199表达的试剂盒，包括稀释液45mL、脱色液1mL、染色液A 0.5mL、染色液B 1mL、羊抗CA199一抗100μL、兔抗羊IgG/HRP 100μL、0.1%Triton X-100 100μL、0.3% H₂O₂ 100μL、试剂A 15ml、试剂B 50ml、6×PBS缓冲液 60mL。