[发明专利]一种血小板生成素拟肽-Fc融合蛋白的制备方法在审
| 申请号： | 202010305339.8 | 申请日： | 2020-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN113527508A | 公开（公告）日： | 2021-10-22 |
| 发明（设计）人： | 路建光;王强;许俊;黄宗庆;李晓婉;鲍玲娜 | 申请（专利权）人： | 上海多米瑞生物技术有限公司;上海医药工业研究院 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C07K1/18;C07K1/20 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 徐林强;崔佳佳 |
| 地址： | 201203 上海市浦东新区中国（*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 血小板 生成 素拟肽 fc 融合 蛋白 制备 方法 | ||
1.一种血小板生成素拟肽-Fc融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：
(6)将血小板生成素拟肽-Fc融合蛋白提取液依次经过第一阳离子交换树脂柱层析、疏水柱层析和第二阳离子交换树脂柱层析纯化，得到血小板生成素拟肽-Fc融合蛋白。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的第一阳离子交换树脂柱层析的填料选自下组：SP Sepharose Fast Flow、SP Sepharose High Performance、SOURCE 30S、CMSepharose Fast Flow、Capto S、TOYOPEARL GigaCap S-650M，或其组合。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一阳离子交换树脂柱层析的洗脱为A液和B液的梯度洗脱；
其中，A液为含有无机盐的醋酸-醋酸钠缓冲液；B液为含有无机盐的醋酸-醋酸钠缓冲液。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，B液的洗脱浓度从5-45(v/v)％。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的疏水柱层析的填料选自下组：PhenylSepharose High Performance、Phenyl Sepharose 6Fast Flow(high sub)、PhenylSepharose 6Fast Flow(low sub)、Butyl Sepharose High Performance、ButylSepharose 4Fast Flow、Butyl-S Sepharose 6Fast Flow、Octyl Sepharose 4Fast Flow、TOYOPEARL Phcnyl-650M、TOYOPEARL Phcnyl-600M、TOYOPEARL Butyl-650M、TOYOPEARLButyl-600M、TOYOPEARL PPG-600M、TOYOPEARL Hexyl-650C，或其组合。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述疏水柱层析的洗脱为C液和D液的梯度洗脱；
其中，C液为含有无机盐的醋酸-醋酸钠缓冲液；D液为醋酸-醋酸钠缓冲液。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，D液的洗脱浓度从30-100(v/v)％。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的第二阳离子交换树脂柱层析的填料选自下组：SP Sepharose Fast Flow、SP Sepharose High Performance、SOURCE 30S、CMSepharose Fast Flow、Capto S、TOYOPEARL GigaCap S-650M，或其组合。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二阳离子交换树脂柱层析的洗脱为E液和F液的梯度洗脱；
其中，E液为含有无机盐的醋酸-醋酸钠缓冲液；F液为含有无机盐的醋酸-醋酸钠缓冲液。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，F液的洗脱浓度从0-50(v/v)％。
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