[发明专利]一种脂肪组织的保存方法、脂肪组织的保存液及其制备方法

说明书

本发明涉及一种脂肪组织的保存方法、脂肪组织的保存液及其制备方法，属于及生物离体组织或器官的保存领域。本发明提供的脂肪组织保存液，包括聚乙二醇400、营养成分、抗菌剂、右旋糖酐‑40和细胞凋亡抑制剂，其中，聚乙二醇400中含有终浓度为5％(v/v)的人血白蛋白、1×诺佛沙星、终浓度为1％(v/v)的右旋糖酐‑40和终浓度为5‑20ng/mL的Ac‑DEVD‑CHO。本发明提供的脂肪组织保存液成本低廉，成分稳定、安全、无任何毒副作用，且能用于离体脂肪组织长时间保存，能在72h内维持脂肪间充质干细胞原有的生物学特性，能很好的维持脂肪间充质干细胞活力，不引起细胞的功能性的变异。

技术领域

本发明涉及一种脂肪组织的保存方法、脂肪组织的保存液及其制备方法，属于及生物离体组织或器官的保存领域。

背景技术

脂肪组织(Adipose tissue)主要由大量群集的脂肪细胞构成，由疏松结缔组织分隔成小叶。根据脂肪细胞结构和功能的不同，脂肪组织分为两类。黄(白)色脂肪组织呈黄色(在某些哺乳动物呈白色)，即通常所说的脂肪组织，它由大量单泡脂肪细胞集聚而成，细胞中央有一大脂滴，胞质呈薄层，位于细胞周缘，包绕脂滴。在HE切片上，脂滴被溶解成一大空泡，胞核扁圆形，被脂滴推挤到细胞一侧，连同部分胞质呈新月形。黄色脂肪组织主要分布在皮下、网膜和系膜等处，约占成人体重的10％，是体内最大的贮能库，参与能量代谢，并具有产生热量、维持体温、缓冲保护和支持填充等作用。

此外，脂肪组织中含有大量的脂肪干细胞，但脂肪组织在离体情况下活力会逐渐下降，这直接影响了分离后的细胞质量。脂肪组织内的干细胞活力如何维持成为了首要解决的问题。在此之前，人们在DMEM/F12等基础培养基的基础上添加青霉素、链霉素、人血白蛋白等物质用于保存离体脂肪组织。但是由于营养成分单一、抗生素种类过多且浓度大、脂肪组织与保存液不相容出现分层等原因，导致脂肪组织中的干细胞在长期保存或运输中出现活力低下、甚至死亡等现象。

随后，人们进一步改善保存液的组成体系，以无机离子构成的缓冲液的基础上添加数种氨基酸和抗生素以维持离体脂肪组织活性、降低染菌率。这些措施虽然在较长时间内很好的维持了种子细胞的活性。但保存液的成分复杂，配制过程繁琐，不能便捷的应用。为了进一步的适应临床应用需要，开发一种营养成分多元且方便配制的脂肪组织保存液成为了当务之急。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种成本低廉、成分稳定、安全、无任何毒副，且能很好的维持脂肪间充质干细胞活力，不引起细胞的功能性变异的脂肪组织保存液。

本发明的另一目的是提供上述脂肪组织保存液的制备方法。

本发明的再一目的是提供脂肪组织的保存方法，将脂肪组织保存于脂肪组织保存液中。

本申请的发明人通过研究发现，本发明所述脂肪组织的保存液用于维持脂肪间充质干细胞活率的关键是提供合适的保存环境及营养供给，保证离体脂肪组织在保存液中长时间的维持活率。因此，本发明所述脂肪组织中的成分和运输过程中各条件成为提高细胞活率至关重要的因素。在本发明以前，白蛋白和氨基酸(组氨酸、还原型谷胱苷肽)常作为维持脂肪间充质干细胞的活力营养来源，而本申请在此基础上进一步改进了保存液的基础液的成分和营养体系，同时优化保存液中的成分组成和改良了运输条件，尽可能的维持细胞存活率，维持其生物特性。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种脂肪组织保存液，包括聚乙二醇400、营养成分、抗菌剂、右旋糖酐-40和细胞凋亡抑制剂。

优选地，所述营养成分为人血白蛋白。

本发明首次采用了聚乙二醇400(PEG-400)作为基础成分，该物质与油脂类物质具有良好的相容性，还能与水类物质相容后，分理出脂类物质；人血白蛋白作为脂肪间充质干细胞保存液的营养成分。此外，添加的凋亡抑制剂可以大大的提高细胞的抗逆性，维持细胞活力，使得脂肪组织在离体和长期运输的条件下，仍能保证脂肪干细胞在离体的情况下仍能维持原有细胞形态及生物特性。