[发明专利]一种体外诱导人脐带间充质干细胞分化为具有胰岛素分泌功能的类胰岛团的方法

说明书

本发明公开了一种体外诱导人脐带间充质干细胞分化为具有胰岛素分泌功能的类胰岛团的方法。所述方法为，将Uc‑MSCs细胞接种铺板使其12‑36小时后达到100％汇合度，再用PBS清洗，再加入胰酶消化，再加入分化培养基，培养即可。本发明所述方法只用一步法就可以高效快速地将人脐带间充质干细胞分化为具有体内外应答葡萄糖分泌胰岛素功能的类胰岛团(islet‑like clusters)。所提供的诱导方案，可为1型及中晚期2型糖尿病患者进行胰岛移植提供供体来源。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，尤其涉及一种体外诱导人脐带间充质干细胞分化为具有胰岛素分泌功能的类胰岛团的方法。

背景技术

糖尿病分型中，以1型和2型糖尿病为主，其中1型糖尿病主要是由于自身免疫系统攻击胰腺β细胞导致机体无法合成胰岛素引起胰岛素绝对不足，而2型糖尿病主要是由于胰岛素抵抗和机体无法对胰岛素进行充分反应导致β细胞功能和结构破坏，引起胰岛素相对不足。

在糖尿病的治疗策略中主要有以下几种方法：胰岛素和胰岛素类似物、胰岛素增敏剂、胰岛素促泌剂，这三类药物都只能对症治疗，无法从根本上治疗糖尿病；胰岛和整个胰腺组织的移植手术除了供体来源不足之外，还存在严重的免疫排斥反应；胚胎干细胞或诱导性的多能干细胞治疗方式存在多向分化的成瘤性风险；近年来，同样具有分化能力且免疫原性低的各种来源的间充质干细胞在疾病治疗中应用广泛，其中脐带间充质干细胞(Uc-MSCs)是来源于新生儿脐带的间充质干细胞，其来源广泛且易于获取。

近年来，很多文献报导了体外诱导胚胎干细胞或间充质干细胞为类胰岛团的方法，然而大部分诱导方法步骤繁琐复杂、历时较长且分化效率不高(Bai,C.,et al.(2015)；Kroon,E.,et al.(2008)；Limbert,C.,et al.(2011)；Moshtagh,P.R.,et al.(2013)；Gao,F.,et al.(2008)；Sun,B.,et al.(2015))，有相关专利申请诱导脐带间充质干细胞分化为胰岛素分泌型细胞的培养基和方法，申请号为CN201710678107.5和CN201510814060.1，的两个专利申请中使用的方法也是多步诱导且分化培养基中需要包含细胞因子等多种诱导分化的物质，步骤繁杂，分化效率低，不利于临床应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种体外诱导人脐带间充质干细胞分化为具有胰岛素分泌功能的类胰岛团的方法。

为实现上述目的，本发明提供一种体外诱导人脐带间充质干细胞分化为具有胰岛素分泌功能的类胰岛团的方法，其特征在于，所述方法为，将Uc-MSCs细胞接种铺板使其12-36小时后达到100％汇合度，再用PBS清洗，再加入胰酶消化，再加入分化培养基，培养即可。

进一步，所述PBS为1x PBS；

进一步，所述用PBS清洗的次数为2-4次；优选的，清洗的次数为2-3次。

进一步，所述胰酶为0.05％-1％胰酶。

进一步，所述分化培养基的体积比为DMEM/F-12 1:1+1％BSA+1x ITS。

进一步，所述诱导培养的时间为1-144小时。

进一步，所述培养的条件为在37℃，95％湿度的CO₂培养箱中培养。

本发明所述方法只用一步法就可以高效快速地将人脐带间充质干细胞分化为具有体内外功能的类胰岛团(islet-like clusters)。所提供的诱导方案，可为于1型及中晚期2型糖尿病患者进行胰岛移植提供供体来源。