[发明专利]一种非洲猪瘟免疫抗原及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及免疫检测技术领域，公开了一种非洲猪瘟免疫抗原及其制备方法和应用。本发明所述免疫抗原为偶联金纳米颗粒的非洲猪瘟结构蛋白复合物，所述非洲猪瘟结构蛋白复合物为非洲猪瘟P72蛋白和B602L蛋白。本发明通过毕赤酵母表达系统成功表达非洲猪瘟病毒正确折叠P72三聚体和B602L复合物，同时联合金纳米颗粒的特性，获得了具有较高免疫效果的非洲猪瘟免疫抗原。此外，毕赤酵母表达系统易于发酵放大，且表达蛋白成本低，易于工业化应用；金纳米颗粒偶联结构蛋白复合物方法简单，方便，易于规模化放大。本发明免疫抗原偶联物动物实验免疫效果显著增强，能够解决亚单位疫苗的缺陷，在疫苗应用价值潜力巨大。

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，具体涉及一种非洲猪瘟免疫抗原及其制备方法和应用。

背景技术

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种急性、热性、高度接触性及高度致死性传染病，死亡率接近100％，被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物疫病，在我国被列为一类动物疫病。目前针对非洲猪瘟，尚没有有效的预防疫苗和特效药物，疫情爆发后进行隔离扑杀是主要的防控手段。2018年8月在我国首次爆发非洲猪瘟，导致上千万头猪被扑杀，给我国养猪业造成巨大经济损失。根据以往经验，要想根除非洲猪瘟，需要花费漫长的时间和巨大的人力物力，因此，针对非洲猪瘟疫情，目前急需有效的预防疫苗和治疗药物。

非洲猪瘟病毒是非洲猪瘟病毒科非洲猪瘟病毒属的唯一成员，是一种有囊膜的双链DNA病毒。在电镜下呈正六边形，正20面体结构，直径约200nm，由5层同心圆结构组成，由内到外依次为类核、核壳、内膜、衣壳和外囊膜。非洲猪瘟病毒可编码200多种蛋白质，其中P72蛋白是非洲猪瘟病毒的主要结构蛋白，也是组成病毒20面体衣壳的主要成分，P72蛋白占病毒颗粒总重33％左右；P72蛋白具有保守的抗原性和稳定的免疫原性，常用于血清学诊断和免疫制剂开发。

由于非洲猪瘟病毒非常大，包含的蛋白非常多，无法形成病毒样颗粒，因此非洲猪瘟疫苗研究的方向集中在基因缺失减毒活疫苗和亚单位疫苗两个方向。目前研究表明，正确折叠的非洲猪瘟全长P72蛋白只能在HEK293F细胞中表达，且表达成本太高，不适于作为动物疫苗使用。此外，现有技术主要通过重组表达获得蛋白，然后与佐剂混合作为亚单位疫苗。但亚单位疫苗与传统疫苗相比存在免疫水平较低，容易降解，免疫持续期不理想等，因此需要寻求一种方法提高亚单位疫苗的免疫优势，促进其应用价值。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种非洲猪瘟免疫抗原及其制备方法，使得所述免疫抗原能够显著提高免疫效果；

本发明的另外一个目的在于提供上述免疫抗原在制备非洲猪瘟疫苗中的应用。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种非洲猪瘟免疫抗原，其为偶联金纳米颗粒的非洲猪瘟结构蛋白复合物，所述非洲猪瘟结构蛋白复合物为非洲猪瘟P72蛋白和B602L蛋白。

作为优选，所述非洲猪瘟P72蛋白和B602L蛋白的质量比为5:1-10:1。

金纳米颗粒具有较好的生物相容性和独特的理化性质，本发明发现将金纳米颗粒与非洲猪瘟结构蛋白复合物偶联，可增强免疫抗原的稳定性及在血液中的半衰期，延长其免疫效果的持续性。金纳米颗粒大小与微生物大小相当，将金纳米颗粒与非洲猪瘟免疫抗原偶联后，能更好的被抗原提呈细胞吞噬，诱导其有效的特异性免疫应答，增强其免疫响应。

此外，通过P72和B602L在蛋白表达系统中共表达可得到正确折叠的P72三聚体，协同两个蛋白及金纳米颗粒的作用，达到了提高免疫效果的目的。

作为优选，所述非洲猪瘟结构蛋白复合物通过蛋白表达系统共表达获得；在本发明具体实施方式中，所述蛋白表达系统选用毕赤酵母表达系统，所述毕赤酵母为SMD1168毕赤酵母。