[发明专利]一种人工表皮化妆品检测试剂盒的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种人工表皮化妆品检测试剂盒的制备方法及其应用。本发明在聚碳酸酯膜支架材料上培养人皮肤组织细胞：人成纤维细胞和表皮细胞，制备具有真皮层和表皮层结构的人工表皮。本发明制备的人工表皮化妆品检测试剂盒可检测化妆品对人皮肤的刺激性、腐蚀性、抗衰老性、抗氧化、美白功效等。

技术领域

本发明涉及一种人工表皮化妆品检测试剂盒的制备方法及其应用，属于细胞培养领域。

背景技术

随着社会的发展和现代人们生活水平的提高，越来越多的人更加关注自身的外在形象，并且希望自己能以美好形象出现在各种活动场合下以增加自信，与此同时人们更加追求皮肤的健康，所以更多的人希望以健康的皮肤和美好的形象展现自身对高端生活的追求。因此，各种功效类化妆品一直是人们所追求的，并且化妆品的市场占有率越来越大，而且品牌种类日益增多。那么，面对市面上琳琅满目的化妆品产品，消费者如何判断产品的抗衰老、抗氧化和美白功效及其对皮肤的刺激性、腐蚀性伤害就成为一个值得关注的问题。

传统的化妆品检测是利用家兔体内眼刺激法，实验动物作为人类的替身为人类的科学发展起到了不可替代的作用，随着科学技术的发展，特别是生命科学研究领域实验动物使用数量的猛增，实验动物的痛苦及其权利引起了社会公众的极大关注。优化替代检测方案有计算机模拟分析、牛眼混浊通透性实验、离体的兔眼实验、离体的鸡眼实验和鸡胚绒毛尿囊膜实验等。但面对动物伦理和人种属性差异的挑战，Russell和Burch提出了3R原则。自1959年Russell和Burch提出动物实验的减少、替代和优化(reduction，replacement，andrefinement，3R)理论以来，特别是近20年，不再以动物模式为基础的毒理学系统已成为生物医学重要发展方向，并被政府和研究机构所接受。一些动物实验替代方法成为关系国际贸易的技术壁垒。欧洲替代法验证中心在2007年5月发布的“人皮肤模型用于体外皮肤刺激试验的技术标准”指南，以及在2008年11月发布的“两项体外皮肤刺激试验验证方法”声明中，均已表明组织工程皮肤可作为体外皮肤刺激试验的替代模型。因此在实验室条件下构建可用于皮肤刺激试验的组织工程皮肤模型可有效解决这些问题。

发明内容

本发明克服了上述现有技术的不足，提供一种人工表皮化妆品检测试剂盒的制备方法及其应用。本发明在聚碳酸酯膜支架材料上增加人皮肤组织细胞：人成纤维细胞和表皮细胞，制备具有真皮层和表皮层结构的人工表皮。本发明制备的人工表皮化妆品检测试剂盒可应用于化妆品相关功效的检测。

一种人工表皮化妆品检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

(1)取人皮肤组织原始样本分离获得原代皮肤细胞，所述原代皮肤细胞分别经过真皮细胞培养基和表皮细胞培养基选择性培养后可获得人皮肤成纤维细胞和人皮肤表皮细胞；

(2)将步骤(1)中获得的人皮肤成纤维细胞进行传代培养，传代到P3代，获得P3代人皮肤成纤维细胞悬液；

(3)将步骤(1)中获得的人皮肤表皮细胞进行传代培养，传代到P3代，获得P3代人皮肤表皮细胞悬液；

(4)取带聚碳酸酯膜的小室置于六孔细胞培养板中，小室使用Coating Matrix预处理，取步骤(2)制备的P3代人皮肤成纤维细胞悬液100-500μl和Ⅰ型胶原蛋白混合，加入上述预处理后的小室中，混合后胶原蛋白终浓度0.8mg/ml，35-37℃培养箱中静置20-60min，静置后，在上述小室内外部加真皮培养基，35-37℃培养箱中培养2-3天，弃掉真皮培养基，培养的真皮层渗液2-3次，获得装有人工皮肤真皮层的小室；