[发明专利]一种乳制品中乳果糖的检测方法

说明书

本发明提供一种乳制品中乳果糖的检测方法，包括：乳制品样品中加入β‑D‑半乳糖苷酶，通过酶解反应乳糖、乳果糖生成半乳糖、果糖和葡萄糖，半乳糖、葡萄糖和果糖分别与甲氧胺进行肟化反应后，生成的反应物再与N‑甲基‑N‑三甲基硅烷三氟乙酰胺进行衍生化反应，最终得到测试液。采用超高效液相色谱串联质谱仪对测试样液进行分析，得到乳果糖的含量。方法能够准确、灵敏地测定巴氏杀菌乳中的乳果糖含量。

技术领域

本发明属于乳果糖检测领域，特别涉及到一种乳制品中乳果糖的检测方法。

背景技术

液态乳在生产过程中通常采用各种不同的热处理来灭菌，而加热过程中也破坏了营养物质。许多国家和国际组织都选用一些与热处理强度相关的指标来估计液态乳的热损害程度从而评价液态乳的加工质量，而乳果糖是在加工过程中产生的重要热敏感指标。

现有的关于乳果糖的分析方法主要有酶法、离子色谱法等，由于巴氏杀菌乳中含有很多乳糖，而乳糖与乳果糖为同分异构体，使在乳果糖的测定过程中增大了分离和定性定量的难度。随着近年来液相色谱串联质谱仪的普及和检测技术的不断研究与开发，使运用液相色谱串联质谱仪来测定乳果糖成为现实。但是，采用液相色谱串联质谱仪测定乳果糖灵敏度低，检出限高，容易受到乳糖的干扰，而且乳果糖存在多种旋光异构体，直接测量不能够精确定量乳果糖的含量。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是研究并提供一种乳制品中乳果糖的检测方法，该方法能够准确、灵敏地测定乳制品中的乳果糖含量。

本发明提供以下技术方案：

一种乳制品中乳果糖的检测方法，包括如下步骤

（1）取乳制品样品，用水稀释后，加入亚铁氰化钾溶液、硫酸锌溶液和磷酸盐缓冲溶液，形成样品稀释液，经稀释后加入β-D-半乳糖苷酶恒温培养，得到酶解液，加入甲醇定容，加入内标物后氮气吹干；加入甲氧胺溶液反应，再加入N-甲基-N-三甲基硅烷三氟乙酰胺，冷却后定容，去除沉淀后得待测液；

（2）使用超高效液相色谱串联质谱仪对检测方法步骤（1）得到的待测液进行检测分析，计算得到乳果糖含量。

根据本发明，步骤（1）中的乳制品为巴氏杀菌乳，UHT乳品，生鲜乳或其他乳制品；例如所述乳制品为液态的巴氏杀菌乳。

根据本发明，步骤（1）中，加入β-D-半乳糖苷酶后反应温度为45℃-55℃，例如50℃；培养时间0.5-2h，例如1h、1.5h。

根据本发明，步骤（1）中，加入甲氧胺后反应温度为30℃-40℃，例如35℃、37℃，反应时间为1-1.5h。

根据本发明，步骤（1）中，加入N-甲基-N-三甲基硅烷三氟乙酰胺后反应温度为30℃-40℃，例如35℃、37℃；反应时间为0.5-1.5h，例如0.5h，1h，1.2h。

根据本发明，所述步骤（1）中的亚铁氰化钾溶液的浓度为100-150g/L，例如为110g/L 、120 g/L 、130 g/L，与乳制品样品的体积比为2:（1-5），硫酸锌溶液浓度为168 g/L，与乳制品样品的体积比为2:（1-5）。

根据本发明，所述步骤（1）中β-D-半乳糖苷酶与样品稀释液的体积比为1:（1-5）。

根据本发明，所述步骤（1）中甲醇稀释液氮气吹干后，加入的甲氧胺浓度为10-20mg/mL，甲氧胺溶液与乳制品样品的体积比为（1-3）：100。在本发明中，甲氧胺的添加量相对于待测液样品中的乳果糖是过量的，以确保样品中的糖类可以充分反应。

根据本发明，所述步骤（1）中加入的衍生化试剂N-甲基-N-三甲基硅烷三氟乙酰胺与乳制品样品的体积比为1:50-100。