[发明专利]硫氧还蛋白标签融合蛋白免疫亲和柱的制备方法、免疫亲和柱及其运用

说明书

本发明公开了一种硫氧还蛋白标签融合蛋白免疫亲和柱的制备方法，其包括如下步骤：S1、制备N个硫氧还蛋白单克隆抗体；S2、针对每一所述硫氧还蛋白单克隆抗体制备与其对应的免疫亲和柱，以获得N个免疫亲和柱；以及S3、运用N个免疫亲和柱中的一个或多个对同一硫氧还蛋白标签融合蛋白进行纯化，选取纯化效果达到预期值的免疫亲和柱作为目标硫氧还蛋白标签融合蛋白免疫亲和柱。其运用多个免疫亲和柱对同一硫氧还蛋白标签融合蛋白进行纯化，选取纯化效果达到预期值的免疫亲和柱作为目标硫氧还蛋白标签融合蛋白免疫亲和柱，再通过该目标硫氧还蛋白标签融合蛋白免疫亲和柱对硫氧还蛋白标签融合蛋白进行纯化，以提高纯化效率和效果。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体为一种硫氧还蛋白标签融合蛋白免疫亲和柱的制备方法、免疫亲和柱及其运用。

背景技术

分子生物学及蛋白质组学是生命科学研究领域的热门学科，为了研究蛋白质的结构、功能等性质，必须获得大量高纯度蛋白。为提高蛋白表达量和便于纯化，目前多在目标蛋白表达中人为引进一段融合标签多肽形成重组蛋白。

原核表达系统(如大肠杆菌蛋白表达)是当前重组蛋白的主要生产系统之一，但利用原核表达系统表达重组蛋白时，为了提高蛋白的表达量，往往在目的蛋白前添加硫氧还蛋白标签(Trx)，得到硫氧还蛋白标签重组蛋白，后期根据需要可以通过酶切的方法去掉目的蛋白前的硫氧还蛋白标签即可获得目的蛋白。

而目前普遍采用的利用组氨酸标签(6×his)亲和层析法中，由于融合蛋白的N端或C端6×his可能被目的蛋白包裹，以至于其无法与亲和填料结合，因此无法对硫氧还蛋白标签重组蛋白进行高效纯化。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种硫氧还蛋白标签融合蛋白免疫亲和柱的制备方法、免疫亲和柱及其运用，其运用多个免疫亲和柱对同一硫氧还蛋白标签融合蛋白进行纯化，选取纯化效果达到预期值的免疫亲和柱作为目标硫氧还蛋白标签融合蛋白免疫亲和柱，再通过该目标硫氧还蛋白标签融合蛋白免疫亲和柱对硫氧还蛋白标签融合蛋白进行纯化，以提高纯化效率和效果。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一方面，提供了一种硫氧还蛋白标签融合蛋白免疫亲和柱的制备方法，其包括如下步骤：

S1、制备N个硫氧还蛋白单克隆抗体，N为正整数；

S2、针对每一所述硫氧还蛋白单克隆抗体制备与其对应的免疫亲和柱，以获得N个免疫亲和柱；

以及S3、运用N个免疫亲和柱中的一个或多个对同一硫氧还蛋白标签融合蛋白进行纯化，选取纯化效果达到预期值的免疫亲和柱作为目标硫氧还蛋白标签融合蛋白免疫亲和柱。

优选的，所述步骤S1中包括：

S11、诱导硫氧还蛋白表达，并对硫氧还蛋白进行纯化；

S12、建立硫氧还蛋白单克隆抗体阳性杂交瘤细胞株，注射至实验动物体内后收集腹水，且在纯化腹水后获得N个硫氧还蛋白单克隆抗体。

优选的，所述步骤S11包括：S111、将表达载体转入宿主细胞内，通过化学方法和/或物理方法诱导硫氧还蛋白表达；S112、对诱导表达的硫氧还蛋白进行纯化。

优选的，所述步骤S12包括：S121、选取实验动物，且将纯化后的硫氧还蛋白作为抗原分阶段注射至实验动物体内，以完成动物免疫，且在完成动物免疫后取实验动物脾组织；

S122、用PEG将实验动物脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，筛选出阳性融合细胞株，且在对阳性融合细胞株进行亚克隆后进行筛选，待亚克隆阳性率达到100％时建立硫氧还蛋白单克隆抗体阳性杂交瘤细胞株；