[发明专利]抗人IL12/23稳转细胞株及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗人IL12/23稳转细胞株及其构建方法和应用，所述的细胞株被命名为抗人IL12/23 CHO‑S稳转细胞株，于2020年3月11日保藏在位于武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No.C202050。本发明的抗人IL12/23稳转细胞株CHO‑S的抗人IL12/23抗体产量可达到2.9g/L，是现有的抗人IL12/23抗体表达细胞株的6倍；不同生产批次之间抗体产量稳定、抗体质量高。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种抗人IL12/23稳转细胞株及其构建方法和 应用。

背景技术

IL12/23(白细胞介素12/白细胞介素23)是在炎症和免疫应答中自然出现的细胞因子， 被认为在免疫介导的炎症性疾病中发挥了关键作用，包括斑块型银屑病、银屑病关节炎、克 罗恩病、系统性红斑狼疮等。

抗人IL12/23单抗能够通过与IL-12和IL-23所共有的p40亚单位相结合，阻止其与细胞 表面的受体IL-12β1相结合，来抑制这2种前炎性细胞因子，降低因IL12/23过量产生和释 放引发的炎症反应，对于治疗由IL12/23过量产生引发的疾病具有重要的临床意义。抗人 IL12/23单抗(乌司奴单抗)是一种可自我注射的生物治疗药物，它在国家食品药品监督管理总 局(CFDA)获批了1个适应症，银屑病的治疗。

分泌单克隆抗体细胞株的传统制备方法为免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合法，包括抗 原免疫、细胞融合、细胞株筛选、细胞库构建等过程。由于小鼠抗体相对于人体为异种抗原， 因此当小鼠单克隆抗体注入人体后会引发机体严重的排斥反应。同时，传统方法制备的融合 细胞株容易产生染色体丢失、基因缺失等现象，严重影响单克隆抗体生产过程中不同批次之间的稳定性，影响产品质量。此外，融合细胞株还存在抗体产量低、细胞培养困难等问题。

发明内容

本申请的发明目的是提供一种具有较高的抗人IL12/23抗体产量的抗人IL12/23稳转细胞 株及其构建方法和应用。

为实现上述发明目的，本申请的技术方案如下：

一种抗人IL12/23稳转细胞株，所述的细胞株被命名为抗人IL12/23CHO-S稳转细胞株， 于2020年3月11日保藏在位于武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No. C202050。

所述的抗人IL12/23稳转细胞株的构建方法包括以下步骤：

(1)制备含有抗人IL12/23抗体重链基因的质粒和含有抗人IL12/23抗体轻链基因的质 粒，并将上述两种质粒共转染亲代CHO-S细胞；

(2)对转染完成的CHO-S细胞进行Puromycin/G418筛选，获得稳转细胞；

具体地，所述的Puromycin/G418筛选包括：将转染完成的细胞培养于完全培养液中，48 h后将完全培养液更换为含有10ug/mL puromycin和800ug/mL G418的筛选培养液，并每隔 3-4天更换一次筛选培养液，直至细胞稳定生长；

作为优选，所述的筛选培养液中puromycin和G418的终浓度分别为10ug/mL和800ug/mL。

作为优选，所述的Puromycin/G418筛选还包括：将在筛选培养液中稳定生长的细胞接种 至完全培养液中继续培养，获得已成功转染的稳转细胞。

作为优选，将在筛选培养液中稳定生长的细胞接种至完全培养液中继续培养2-3天，接 种后，完全培养液中的细胞密度为5×10⁵cells/mL。

(3)对稳转细胞进行单克隆细胞株分选，获得所述的抗人IL12/23稳转细胞株CHO-S。