[发明专利]一种血液中花生四烯酸的检测方法

说明书

本发明公开了一种血液中花生四烯酸的检测方法，利用超滤膜丝辅助富集血液样品中不饱和脂肪酸花生四烯酸。具体方法为：将处理好的超滤膜丝浸没于血液样品中，常温静置，取出干燥后加入适量的衍生化试剂，同步进行洗脱和衍生化反应，由于超滤膜丝的微孔结构的滤过效应和膜丝材料的特殊选择性，可以去除血液样品中大分子蛋白质和各种复杂结构的代谢物对目标分析物的干扰，完成血液样品中关键代谢物花生四烯酸的富集，借助气相色谱质谱联用仪，实现花生四烯酸的检测与分析。

技术领域

本发明属于生物体内代谢物质检测技术领域，利用超滤膜丝辅助富集血液样品中代谢物进行检测，该代谢物为不饱和脂肪酸花生四烯酸，即具体涉及一种血液中花生四烯酸的检测方法。

背景技术

随着代谢组学在医药生物各领域中的发展，色质谱联用技术已经成为组学分析平台中最为常见的技术手段之一。对于生物质样本(如尿、血、唾液以及细胞等)中氨基酸、多糖、多醇、维生素、激素、酰胺、胆固醇、多胺、脂肪酸、有机酸、磷酸酯、核苷酸、多肽等小分子代谢物而言，分辨率强、灵敏度高、重现性好以及高通量为色质谱联用技术分析的优点。

花生四烯酸(AA)，全顺式-5，8，11，14-二十碳四烯酸，其结构中含有四个碳-碳双键，一个碳-氧双键，属ω-6族长链多元不饱和脂肪酸，广泛分布于动物界。AA是人体大脑和视神经发育的重要物质，对提高智力和增强视敏度具有重要作用。AA在血液、肝脏、肌肉和其他器官系统中作为磷脂结合的结构脂类起重要作用。AA具有酯化胆固醇、增加血管弹性、降低血液粘度，调节血细胞功能等一系列生理活性，对预防心血管疾病、糖尿病和肿瘤等具有重要功效。高纯度的AA是合成前列腺素，血栓烷素和白细胞三烯等二十碳衍生物的直接前体，这些生物活性物质对脂质蛋白的代谢、血液流变学、血管弹性、白细胞功能和血小板激活等具有重要的调节作用。在幼儿时期AA属于必需脂肪酸，AA的缺乏对于人体组织器官的发育，尤其是大脑和神经系统发育可能产品严重不良影响。成长后人体能由必需脂肪酸亚油酸、亚麻酸转化而成，因此属于半必需脂肪酸。因此，血液中花生四烯酸浓度的测定对相关领域的研究有着重要意义。但目前花生四烯酸一直是血液代谢物检测分析的难点。

代谢物靶标分析是对某个或某几个特殊组分，需要进行样品前处理，去除杂质干扰，提高代谢物靶标分析检测的灵敏度。截止目前未见有关超滤膜丝辅助富集血液样品中代谢物进行检测的报道，也未见超滤膜丝应用到代谢物靶标花生四烯酸的分析检测中。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种血液中花生四烯酸的检测方法，利用超滤膜丝辅助富集血液样品中不饱和脂肪酸花生四烯酸，实现对花生四烯酸的快速准确的检测。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种血液中花生四烯酸的检测方法，包括：

1)超滤膜丝用有机溶剂清洗，室温干燥后，浸没于待测血样中，静置30～60min后取出，室温干燥，得到富集了目标分析物的待测超滤膜丝；

2)将待测超滤膜丝置于衍生化试剂中，于65～75℃同步进行洗脱和衍生化反应30～50min，反应完成后所得的反应液经离心后，获得上清液；

3)对步骤2)得到的上清液采用气相色谱质谱联用法进行检测。

本发明所述超滤膜丝取自市售的中空纤维超滤膜。中空纤维超滤膜也常称中空纤维膜、超滤膜、超滤膜丝、膜丝等，外形为纤维状并具有中空内腔。中空纤维超滤膜在使用时常多根集聚成帘或成束，适用于MBR膜片或外压柱式超滤膜。

本发明中，超滤膜丝对花生四烯酸具有选择性吸附和富集作用，推测其可能的原理为：用甲醇或丙酮等有机溶剂处理超滤膜丝后，超滤膜丝表面的羟基暴露。花生四烯酸具有四个双键和一个羧基，可以与超滤膜丝上的羟基键合，从而实现超滤膜丝对花生四烯酸的吸附和富集。利用超滤膜丝微孔结构的滤过效应还可以去除血液中大分子蛋白质和各种复杂结构的代谢物对目标分析物的干扰。