[发明专利]质谱法检测游离三碘甲状腺原氨酸和游离甲状腺素试剂盒

说明书

本发明公开了一种质谱法检测游离三碘甲状腺原氨酸和游离甲状腺素试剂盒；所述试剂盒包括：用于平衡透析分离结合态和游离态的三碘甲状腺原氨酸和甲状腺素的试剂；又包括透析液；以及用于通过固相萃取从透析液中提取游离态的三碘甲状腺原氨酸和甲状腺素的试剂；又包括内标溶液、平衡液、淋洗液和洗脱液。本发明的试剂盒检测时，利用平衡透析法将人血清中游离三碘甲状腺原氨酸和游离甲状腺素转移到透析液中，然后通过固相萃取方法将其从透析液中提取出来；通过超高效液相色谱进行分离后，进入质谱进行检测，利用与校准品的比较得到待测样品的浓度，保障了检测结果准确性。不同浓度的质控品保证了检测结果的可靠性。

技术领域

本发明属于生物化学检测领域，涉及一种质谱法检测游离三碘甲状腺原氨酸和游离甲状腺素的试剂盒，尤其涉及超高效液相色谱-串联质谱检测人血清中游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)和游离甲状腺素(FT4)的试剂盒及测试方法。

背景技术

甲状腺激素由颈部的两个圆锥状腺体分泌，它能调节体内多种代谢过程。甲状腺素(T4)和三碘甲状腺原氨酸(T3)是两种主要的甲状腺激素。甲状腺素是在甲状腺囊泡中由酪氨酸和四分子碘结合形成的。在甲状腺或外周体循环中，通过酶介导的消除反应，将一分子碘移除从而形成。合成后的这些激素储存在甲状腺胶体中，在受到促甲状腺素(TSH)刺激后进入循环系统。

在循环系统中，甲状腺激素以游离和结合形态存在。结合态T3、T4的水平会因为TBG的浓度变化而发生改变，但游离T3、游离T4的水平不会受到影响，因而甲状腺激素的生理功能不会受到影响。所以游离T3、游离T4的水平是评价甲状腺功能和研究下丘脑—垂体—甲状腺轴的主要指标之一，可用于原发性及继发性甲状腺疾病的辅助诊断及疗效评价。

测定血清中游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)和游离甲状腺素(FT4)是甲状腺功能亢进与低下，以及亚临床型甲状腺功能亢进的诊断与鉴别诊断最灵敏的指标之一。

临床采用测定血清中游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)和游离甲状腺素(FT4)的传统方法有放免法、酶联免疫技术、化学发光法等。

放免法试剂盒：以FT4为例：血清(血浆)样品的FT4和125I-T4对一定量的FT4抗血清中的抗体产生竞争性结合，使用沉淀剂将其抗原-抗体结合物沉淀，测定沉淀物的放射强度(cpm)。计算被检样品的抗原-抗体结合率，可在标准曲线上查到相应的FT4的含量。早期放免法试剂盒受方法学限制，其灵度和抗干扰能力严重不足，存在很大弊端，已基本上退出市场。

酶联免疫法试剂盒：以测定血清中游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)为例。酶联免疫法原理:用纯化的FT3抗体包被微孔板或磁珠，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的Free-T3抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的Free-T3呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(值)，计算样品浓度。本方法的缺点：操作过程有些繁琐，反应需要时间长，不能一蹴而就；特异性和灵敏度不够；不能同时测试FT3和FT4；依赖于抗体，由于不同厂家生产抗体差异性大，导致FT3和FT4结果差异大。如，CN201310403123-FT3体外诊断试剂盒及其使用方法；CN201510518771-游离甲状腺素的免疫分析试剂盒。