[发明专利]基于GC-MS的小鼠肠-脑轴相关组织样本中短链脂肪酸的检测方法

权利要求书

1.一种基于GC-MS的小鼠肠-脑轴相关组织样本中短链脂肪酸的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

向采集的脑组织、结肠组织、结肠内容物和粪便中加入预冷的超纯水，低温下研磨均匀，然后经涡旋、超声提取、离心，取上清液即得提取液；

向各个提取液中加入内标物2-乙基丁酸，并进行衍生化反应；

衍生后溶液分别经过萃取后，利用GC-MS对各个萃取液中的乙酸、丙酸和丁酸进行检测，检测的方法为：

HP-5毛细管柱，30 m×0.25 mm×0.25 μm；初始温度70℃，保持3 min；然后以10℃/min的速率升温至130℃，以30℃/min的速率升温至280℃，保持2 min；进样口温度：250℃，进样方式：分流进样，分流比为30:1；载气：氦气；离子化方式：电子轰击源EI；离子源温度：230℃；传输线温度：290℃；电离能量：70 eV；溶剂延迟：7 min；采用选择离子模式SIM扫描；

所述检测方法为向各个提取液中加入五氟溴卞进行衍生化反应；

所述衍生化反应还包括将反应结束后的反应体系置于冰上降温的步骤。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：脑组织、结肠组织、结肠内容物和粪便样品与超纯水的质量比为1:4-5。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：低温研磨的温度为3-5℃。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：低温研磨的温度为4℃。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：低温研磨时，脑组织的研磨时间为55-65s；结肠组织的研磨时间为120-180s；结肠内容物的研磨时间为30-60s；粪便的研磨时间为55-65s；

涡旋的工艺条件为：转速为2500 rpm，时间设定为1 min；

超声提取的工艺条件为：设定超声提取时间为10-20 min, 温度设定为3-5℃。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述衍生化反应的方法，包括如下步骤：

向加入内标物的提取液中加入中性缓冲液，然后加入五氟溴卞，混合均匀后，55-65℃水浴加热1-2h，即可。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：所述中性缓冲液为磷酸盐缓冲液。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述萃取过程中使用的有机溶剂为正己烷。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：萃取的时间为1-3min。