[发明专利]一种氟代TF-MUC1糖肽缀合物及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种氟代TF‑MUC1糖肽缀合物，所述糖肽缀合物的结构通式如下：其中，糖肽是如下通式(I)中的任一糖肽：即本发明氟代TF‑MUC1糖肽缀合物中，糖肽的化学结构是明确且单一的，可以通过化学方法大量合成。选择的连接体容易被活化，能够高效率与载体蛋白的偶联，提高载体蛋白的载糖肽量。值得一提的是，氟原子的引入能够增强糖抗原中糖苷键的稳定性，从而提高糖肽抗原的代谢稳定性、脂溶性和生物利用度，解决天然肿瘤相关MUC1糖肽免疫原性差和不稳定的问题。酶联免疫吸附(ELISA)测定显示，免疫后血清中的抗体能够识别天然MUC1，实现交叉识别。

技术领域

本发明属于肿瘤疫苗研制技术领域，尤其是一种氟代TF-MUC1糖肽缀合物及其制备方法和应用。

背景技术

TF抗原是Core 2O-聚糖的前体，由未唾液酸化的Core 1结构(Galβ1-3GalNAcαSer/Thr) 组成，最初是由Thomsen和Friedenreich在红细胞中决定血型的糖蛋白上发现的。它在正常细胞上会被进一步糖基化或被唾液酸修饰所掩蔽。然而，TF抗原暴露于很多癌症细胞表面，包括乳腺癌、肺癌、膀胱癌、前列腺癌和胰腺癌等。所以，TF抗原的表达已经作为检测肿瘤的工具并且作为愈后的标准，其分布密度可以用来预测癌症的组织病理学分级、癌细胞的侵袭潜力，以及乳腺、膀胱和前列腺肿瘤早期复发的可能性。Georg Springer是乳腺癌中TF抗原研究的先驱，他首先表明所有乳腺癌都表达TF抗原，而且来使用单克隆抗体研究证明TF 抗原在正常上皮或乳腺细胞中仅低水平表达。

黏蛋白1(MUC1)是一种I型跨膜糖蛋白，由两个亚基组成，高度糖基化的细胞外N端结构域(MUC1-N)，从细胞中突出表面可达200～500nm，由20个氨基酸残基串联重复序列(HGVTSAPDTRPAPGSTAPPA)组成，重复数目从20到120个不等，同时序列中的有五个潜在的翻译后O-糖基化位点，位于其中的丝氨酸(Ser)和苏氨酸(Thr)残基上。MUC1属于肿瘤相关抗原高表达的范畴，在许多癌症的肿瘤细胞中都存在MUC-1高表达和异常糖基化。研究表明在近86％的腺癌中都有异常MUC-1的高表达。肿瘤细胞表面的糖基化模式发生了改变，通常被肿瘤相关糖抗原(TACA)覆盖。借此，MUC1通过TACA与凝集素相互作用而发挥的致癌功能。这些相互作用往往导致前肿瘤微环境的产生，有利于肿瘤的进展、转移和肿瘤的逃避。同时，由于肿瘤细胞表面MUC1的糖基侧链变短，新的肽段表位出现，有过量的Tn(GalNAcα-O-Ser/Thr)、TF(Galβ1-3GalNAcα-O-Ser/Thr)、sTn NeuAcα2-6-GalNAcα-O-Ser/Thr等抗原的表达，具有高免疫原性，因此MUC1成为一种非常有潜力的治疗性肿瘤疫苗的靶标。

长期以来一直流行使用蛋白质缀合物制备候选疫苗。不同的蛋白质载体如BSA(牛血清白蛋白)、KLH(匙孔血蓝蛋白)、TTox(破伤风类毒素)等已经被用来与MUC1糖肽缀合以产生免疫应答，因为这些蛋白质载体含有许多表位抗原，具有高度免疫原性。

除了将MUC1糖肽与载体蛋白偶联外，还可以通过对肿瘤相关糖抗原(TACAs)衍生或修饰来进一步增强MUC1糖肽疫苗的免疫原性。由于MUC1糖肽属于内源性结构，是T细胞非依赖性的自身抗原，因此易被免疫系统所耐受，所以为了提高这些内源性结构的免疫原性，可以使用氟原子替代糖分子中的羟基，以期利用电子等排性，增强糖抗原的代谢稳定性和生物利用度，从而进一步提高MUC1糖肽抗原的免疫原性。

通过检索，尚未发现与本发明专利申请相关的专利公开文献。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术中的不足之处，提供一种氟代TF-MUC1糖肽缀合物及其制备方法和应用，该氟代TF-MUC1糖肽缀合物能够激发高滴度的IgG抗体水平，因此能够应用在疫苗方面中。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：