[发明专利]EpCAM在调控人肝前体细胞肝向分化中的应用

说明书

本发明涉及生物医学技术领域，具体是EpCAM在调控人肝前体细胞肝向分化中的应用，以及一种提高人肝前体细胞体外肝向分化效率的方法。本发明优点在于：本发明在研究中发现肝前体细胞表面标志物EpCAM能够通过激活Notch1信号通路负向调控肝向分化。因此，EpCAM不仅是肝前体细胞标志物，同时也是功能分子，通过降低EpCAM的表达，可以实现更高效的肝向分化，获取更优质的功能肝细胞。在临床细胞移植治疗、组织器官修复与再生和生物人工肝领域具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体的说，是一种调控人肝前体细胞肝向分化的方法，以及EpCAM在调控人肝前体细胞肝向分化中的应用。

背景技术

我国是肝病大国，大多数终末期肝病患者无法获得肝移植治疗机会，而肝细胞移植是肝移植的有效替代手段之一，但需要大量功能肝细胞。肝前体细胞处于未分化的干细胞状态，具有发生肝向和胆向分化的潜能，虽然目前我们可在体外诱导肝前体细胞发生肝向分化，但其分化程度尚未达到原代肝细胞水平，这与我们还不了解调控肝前体细胞分化的分子机制有关。因此，阐明分化机制并在此基础上提高肝向分化效率是肝脏研究领域亟待解决的问题。

但是关于EpCAM调控人肝前体细胞肝向分化效率的应用目前还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于，提供EpCAM(Epithelial cell adhesion molecule,上皮细胞粘附分子)在调控人肝前体细胞肝向分化中的应用，以及一种提高人肝前体细胞体外肝向分化效率的方法。

本发明筛选影响肝前体细胞分化的表面标志分子EpCAM，通过慢病毒转染结合免疫荧光检测成熟肝细胞极性维持情况，采用流式细胞术检测成熟肝细胞功能分子表达情况，明确了EpCAM对肝向分化的抑制作用。

本发明的技术方案主要包括：人肝前体细胞的体外增殖和分化，免疫荧光结合共聚焦显微镜检测能呈现成熟肝细胞极性的多药耐药相关蛋白2(MRP2)的表达情况，免疫荧光结合流式细胞术检测成熟肝细胞功能分子(如白蛋白Alb和细胞色素P450 3A4酶(CYP3A4))的表达情况。

本发明的第一方面，提供EpCAM在调控人肝前体细胞肝向分化中的应用。

进一步的，所述的EpCAM抑制人肝前体细胞的肝向分化。

本发明的第二方面，提供EpCAM在制备调控人肝前体细胞肝向分化的试剂中的应用。

本发明的第三方面，提供抑制或下调EpCAM表达量的试剂在促进人肝前体细胞肝向分化中的应用。

本发明的第四方面，提供抑制或下调EpCAM表达量的试剂在制备功能肝细胞中的应用。

进一步的，所述的抑制或下调EpCAM的表达量的试剂包括但不限于：

特异性结合EpCAM的蛋白；

特异性干扰EpCAM基因表达、加工的小干扰分子，如siRNA分子、miRNA分子、反义核苷酸等；

EpCAM抑制剂、拮抗剂、下调剂、阻滞剂、阻断剂等。

本发明的第五方面，提供一种提高人肝前体细胞体外肝向分化效率的方法，所述的方法是将抑制或下调EpCAM表达量的干扰分子转染进人肝前体细胞中。

本发明优点在于：

肝前体细胞的分化受到机体复杂而有序的调控，多重因素对其有重要影响，本发明在研究中发现肝前体细胞表面标志物EpCAM能够通过激活Notch1信号通路负向调控肝向分化。因此，EpCAM不仅是肝前体细胞标志物，同时也是功能分子，通过降低EpCAM的表达，可以实现更高效的肝向分化，获取更优质的功能肝细胞。在临床细胞移植治疗、组织器官修复与再生和生物人工肝领域具有很好的应用前景。

附图说明