[发明专利]一种新型的重组抗表皮生长因子受体单克隆抗体及其应用

说明书

本发明提供了鼠源抗表皮生长因子与其受体单克隆抗体的结合表位，所述结合表位包括为表皮生长因子受体（Epithelial Growth Factor Receptor，EGFR）胞外域的Ser196，Ser222，Lys269，Ser282四个氨基酸。本发明还公开了该单克隆抗体的制备方法以及用途。本发明的抗体通过关键结合氨基酸与EGFR结合并引起EGFR发生剧烈内化进入肿瘤细胞。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，本发明涉及一种新型表皮生长因子受体的特异性抗原表位及其单克隆抗体。另外，本发明还涉及该单克隆抗体的制备方法以及用途。

背景技术

癌症是紧跟心脏病之后的人类第二大主要死亡因素，目前治疗这种致命性疾病的新疗法已取得了重大进展。正产细胞的增殖是通过各自的配体严格激活其生长因子受体来控制的，比如生长因子受体酪氨酸激酶。癌细胞也是在生长因子受体的激活下增殖的，但失去了正常增殖的严格控制。这种失控可能是由很多因素引起，比如生长因子的过度表达或生长因子受体的过度表达，以及由生长因子调控的生化途径的自发性激活。参与致癌的受体包括表皮生长因子受体（Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR），来源于血小板的生长因子受体（PDGFR），类胰岛素生长因子受体（IGFG），神经生长因子受体（NGFR）和成纤维生长因子受体（FGF）等。

表皮生长因子受体（EGFR）广泛分布于哺乳动物的上皮细胞，是一种总相对分子量为170kDa的跨膜糖蛋白。EGFR是ErbB（ErbB 1~4）家族的一员，又称作ErbB1。EGFR由细胞外的配体结合区，疏水跨膜结构域和细胞内的激酶区3个部分组成。其胞内结构包含1个酪氨酸激酶域（tyrosine kinase domain）和具有多个自身磷酸化位点的羧基末端尾，属于受体酪氨酸激酶家族（receptor tyrosine kinase，RTKs）；膜外区域由配体结合位点和2个富含半胱氨酸区域所构成，能结合具有激动功能的多种配体，主要有表皮生长因子（epidermalgrowth factor，EGF）和转化生长因子（transforming growth factor a，TGFa）。EGF或TGFa与EGFR结合后，形成二聚体，结合1个ATP分子，激活EGFR自身酪氨酸激酶活性，使胞内激酶区的数个酪氨酸位点发生自身磷酸化。EGFR二聚体化和磷酸化后，激活下游的ras/raf/MAPK（mitogen activated protein kinase）级联系统和磷酸肌醇激酶（phosphoinositolkinase）系统，成为下游信号转导的亲和位点，与多种参与有丝分裂信号从细胞外传递到细胞内，从而有效调节细胞对外界刺激的反应、细胞增生、存活、黏附、迁移和分化、细胞存活以及生长情况等。最后EGFR与配体的复合物通过胞饮作用进入细胞，被降解或再循环到细胞表面，完成信号转导。因此，一旦这种酪氨酸激酶的功能受阻，将会导致各种疾病产生。

酪氨酸蛋白激酶过度表达时，会阻碍细胞程序死亡，使细胞的生长调控失控，始终处于增生状态，发展成为恶性肿瘤。临床研究表明，许多类型的实质性肿瘤如神经胶质细胞瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、头颈部鳞癌、宫颈癌、食管癌、前列腺癌、肝癌、结肠癌、胃癌等有高水平的EGFR表达。主要机制可能为EGFR发生突变，一般发生在胞外区，极少发生在跨膜区和酪氨酸激酶区，出现配体非依赖性的酪氨酸激酶活化，如非小细胞肺癌（non smalllung cancer，NSCLC）、前列腺癌、乳腺癌、胃癌；多种肿瘤通过自分泌和旁分泌的方式产生过度的EGF和TGFa表达，从而使EGFR信号转导系统过度活化；EGFR自身出现过度表达。EGFR的高度表达可以促进肿瘤细胞的增殖、血管生成、黏附、侵袭和转移、抑制肿瘤细胞的凋亡、导致肿瘤患者存活率低，预后差，疗效差，肿瘤转移可能性大，容易引起肿瘤细胞对各种细胞毒性药物的耐药性。