[发明专利]一种轮状病毒Elisa检测方法及其试剂盒

说明书

本发明涉及一种可以一次性检测A‑C三种基因型轮状病毒的Elisa检测试剂盒，及检测方法。本发明所的试剂盒中含有能够与A‑C三型轮状病毒抗体结合的VP4衍生抗原片段。实验证明，本发明的试剂盒操作简单、快速、敏感性高、特异性强、实验设备要求简单、应用范围广泛；能够解决临床上轮状病毒防治痛点。

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，特别涉及一种用于轮状病毒的Elisa检测方法及其试剂盒。

背景技术

轮状病毒(rotavirus,RV)是引起婴幼儿腹泻的主要病原体之一，且至今没有特效治疗药物；轮状病毒属于呼肠孤病毒科，轮状病毒属，最早在1973由Bishop在胃肠炎病人的十二指肠中发现(Bishop,Davidson, Holmes,et al.Lancet,2(7841),1281-1283,1973)；因其在电镜下形似车轮辐条而得名轮状病毒。

有研究统计显示，90％以上的儿童在3岁前至少感染过一次轮状病毒。而据WHO统计，每年因轮状病毒感染而导致的死亡病例高达60万，而腹泻病例则高达2亿；不仅严重危险婴幼儿声明，还造成了严重的经济负担和社会负担。

RV是借由粪口途径传染的，其主要感染小肠上皮细胞，产生肠毒素(enterotoxin)，从而造成细胞损伤，引起腹泻。临床表现为急性胃肠炎，呈渗透性腹泻病，病程一般为6-7天，发热持续1-2天，呕吐 2～3天，腹泻5天，严重出现脱水、甚至惊厥症状。

轮状病毒是一种双链核糖核酸病毒，属于呼肠孤病毒科；是一种无包膜RNA病毒，RV的基因组由11 条双链RNA组成，分别编码6种结构蛋白(VP1-VP4，VP6和VP7)和6种非结构蛋白(NSP1-NSP6)(Estes and Cohen.Microbiol Rev,53(4),410-449,1989)。RV为二十面体对称结构，其衣壳由三个同心层构成，即由VP1、 VP2和VP3构成的核心层，由VP6构成的内衣壳，以及由VP4和VP7构成的外衣壳。VP6是RV的主要结构蛋白，根据其序列不同，可以将RV病毒分为A、B、C、D、E、F与G共7种类型。其中，A-C可以感染人类和动物，D-G只引起动物感染。而A组RV是最为常见的一种，而人类轮状病毒感染超过90％的案例也都是该种造成的。

VP4和VP7是RV外壳的主要结构蛋白，两者为RV的主要中和抗原。VP4有许多重要功能，包括媳妇和侵入细胞、血凝素、毒力作用等。VP4可以被胰酶酶切形成VP8*(aa1-231)和VP5*(aa248-776)两部分。 VP4蛋白由头部、颈部和基座三个部分构成，其作为轮状病毒的刺突蛋白，在轮状病毒的感染中发挥着重要的作用。

目前轮状病毒检测主要包括以下几类检测方法：1)用轮状病毒抗体致敏血球的检测方法，主要从唾液、粪便等分泌物中检测轮状病毒。该方法的结果不易重复，需要有经验的技术人员；2)聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，其通过提取粪便中病毒RNA，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳形成独特11条区带，来判断是否感染轮状病毒，但是RNA提取较难成功且操作繁琐耗时；3)电镜技术，在大便中用电镜直接检出特殊形态的轮状病毒颗粒，敏感性较高，是鉴定轮状病毒的经典方法。但由于病毒颗粒易于降解常常影响正确诊断，并且电镜设备昂贵，难以普及，故电镜技术的应用大大受到限制，一般只能用于研究；4)基因检测技术，其特异性强、灵敏度高、定量准确，在病原学诊断方面具有很高的应用价值，但其操作复杂、需要专门培训的技术人员、特殊的仪器设备；5)免疫胶体金技术，检测快速且不需要任何仪器设备，适合现场检测。

我国的资料表明，在秋冬季50％-60％的婴幼儿腹泻是由轮状病毒引起的。婴幼儿感染RV后若不及时治疗，会造成严重的脱水和酸中毒，严重时会危及生命；且目前尚无针对轮状病毒的特效药。世界卫生组织(WHO)推荐以预防为主，注意婴幼儿营养和卫生状况来达到降低病毒的感染率。因此及时、准确、快速的对RV感染的诊断对临床有极其重要的意义。