[发明专利]一种以茎段为外植体的齿叶冬青组培快繁方法

说明书

本发明公开了一种以茎段为外植体的齿叶冬青组培快繁方法，包括：步骤1、采集齿叶冬青枝条，清洗消毒；步骤2、将齿叶冬青枝条截成带芽茎段，接种于增殖伸长培养基上进行增殖和伸长培养；所述增殖伸长培养基为添加2.28～9.12μM ZT的MS培养基；步骤3、转移至生根培养基上进行生根诱导得到带根小苗，所述生根培养基为添加有2.07～8.29μM IBA的1/2MS培养基；步骤4、将所得带根小苗移栽至栽培基质中培养；本发明以齿叶冬青幼苗茎段为外植体，通过植物生长调节剂对幼苗茎段的增殖培养和对不定根的诱导研究，成功获得无菌苗微繁成苗快繁体系，齿叶冬青组培苗生根率高达90％以上，移栽存活率高达90％左右。

技术领域

本发明涉及组培技术领域，特别涉及一种以茎段为外植体的齿叶冬青组培快繁方法。

背景技术

齿叶冬青是多枝常绿灌木，高可达5米；叶片革质，倒卵形，椭圆形或长圆状椭圆形，雄花1-7朵排成聚伞花序，花4基数，白色；花萼盘状，花瓣4，阔椭圆形，花冠直径约6毫米，花瓣卵形，子房卵球形，果球形，成熟后黑色；内果皮革质。花期5-6月，果期8-10月。生于海拔700-2100米的丘陵，山地杂木林或灌木丛中。分布于中国、日本和朝鲜。常栽培作庭园观赏树种，欧美各地亦有栽培。齿叶冬青果实属植物种子，发芽十分困难，由于坚硬的种皮和未成熟合子胚的双重休眠，使其具有隔年发芽的特性。齿叶冬青常规育种需要2-3年才能获得幼苗。

为了克服远缘杂交不亲和性，获得远缘杂交品种，打破种子休眠，缩短其育种周期，缩短齿叶冬青的应用年限，节省劳力和财力，组织培养法是快速获得大量繁殖苗的最佳方法。但由于目前组织培养法的齿叶冬青组培苗生根率低，移栽存活率低，限制了其大规模的推广和繁殖。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种以茎段为外植体的齿叶冬青组培快繁方法，齿叶冬青组培苗生根率高达90％以上，移栽存活率高达90％左右，将齿叶冬青的萌发时间由常规育种的2-3年缩短为15-17周。

本发明是这样实现的：

本发明的目的在于提供一种以茎段为外植体的齿叶冬青组培快繁方法，所述方法包括：

步骤1、采集齿叶冬青枝条，清洗消毒；

步骤2、将齿叶冬青枝条截成带芽茎段，接种于增殖伸长培养基上进行增殖和伸长培养；所述增殖伸长培养基为添加2.28～9.12μM ZT的MS培养基；

步骤3、转移至生根培养基上进行生根诱导得到带根小苗，所述生根培养基为添加有2.07～8.29μM IBA的1/2MS培养基；

步骤4、将所得带根小苗移栽至栽培基质中培养。

优选地，所述步骤1中清洗消毒的具体步骤为：选择冬青枝条用洗衣粉清洗10～30min，再用流水冲洗10～30min，转移至超净工作台上用无菌水润洗；用75％酒精浸泡5～20min，再用8％次氯酸钠浸泡15～30min，最后用无菌水冲洗5～6次，待用。

优选地，所述步骤2中的带芽茎的长度为0.5～1.5cm。

优选地，所述步骤2所用的增殖伸长培养基为添加9.12μM ZT的MS培养基。

优选地，所述步骤2中增殖和伸长培养的时间为50～60天。

优选地，所述步骤3中所述生根培养基为添加有4.14μM IBA的1/2MS培养基。

优选地，所述步骤3中生根诱导培养的时间为50～60天。

优选地，所述步骤4中移栽至栽培基质中置于温室苗床上喷雾系统下生长。

本发明具有以下有益效果：