[发明专利]一种以胚为外植体的齿叶冬青组培快繁方法

说明书

本发明公开了一种以胚为外植体的齿叶冬青组培快繁方法，所述方法包括：步骤1、采集齿叶冬青果实，清洗消毒；步骤2、剥出幼胚，接种于基本培养基上，暗培养12～16天；步骤3、当幼胚萌发后转移至光照条件下培养26～30天；步骤4、清洗幼苗并移栽至栽培基质中培养；以齿叶冬青未成熟合子胚为外植体，建立了齿叶冬青植物组织快速繁殖体系，将齿叶冬青的萌发时间由常规育种的2‑3年缩短为5‑7周，且齿叶冬青组培苗发芽率高达100％，移栽存活率高达90％左右。

技术领域

本发明涉及组培技术领域，特别涉及一种以胚为外植体的齿叶冬青组培快繁方法。

背景技术

齿叶冬青是多枝常绿灌木，高可达5米；叶片革质，倒卵形，椭圆形或长圆状椭圆形，雄花1-7朵排成聚伞花序，花4基数，白色；花萼盘状，花瓣4，阔椭圆形，花冠直径约6毫米，花瓣卵形，子房卵球形，果球形，成熟后黑色；内果皮革质。花期5-6月，果期8-10月。生于海拔700-2100米的丘陵，山地杂木林或灌木丛中。分布于中国、日本和朝鲜。常栽培作庭园观赏树种，欧美各地亦有栽培。齿叶冬青果实属植物种子，发芽十分困难，由于坚硬的种皮和未成熟合子胚的双重休眠，使其具有隔年发芽的特性。齿叶冬青常规育种需要2-3年才能获得幼苗。

为了克服远缘杂交不亲和性，获得远缘杂交品种，打破种子休眠，缩短其育种周期，缩短齿叶冬青的应用年限，节省劳力和财力，组织培养法是快速获得大量繁殖苗的最佳方法。但由于目前组织培养法的齿叶冬青组培苗发芽率低，移栽存活率低，限制了其大规模的推广和繁殖。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种以胚为外植体的齿叶冬青组培快繁方法，齿叶冬青组培苗发芽率高达100％，移栽存活率高达90％左右，将齿叶冬青的萌发时间由常规育种的2-3年缩短为5-7周。

本发明是这样实现的：

本发明的目的在于提供一种以胚为外植体的齿叶冬青组培快繁方法，所述方法包括：

步骤1、采集齿叶冬青果实，清洗消毒；

步骤2、剥出幼胚，接种于基本培养基上，暗培养12～16天；

步骤3、当幼胚萌发后转移至光照条件下培养26～30天；

步骤4、清洗幼苗并移栽至栽培基质中培养。

优选地，所述步骤1中齿叶冬青果实为8月份采集呈绿色的齿叶冬青果实。

优选地，所述步骤1中清洗消毒的具体步骤为：将齿叶冬青果实用流水冲洗后转移至超净工作台用无菌水润洗；表面消毒先用75％的酒精浸泡3～15min，再用8％次氯酸钠浸泡10～30min，最后用无菌水冲洗5～6次，放入无菌水中待用。

优选地，所述步骤2所用的基本培养基包括WPM培养基、MS培养基、1/2MS培养基、1/4MS培养基中的一种。最佳为WPM基本培养基。

优选地，所述步骤2中暗培养时间为14天。

优选地，所述步骤3中光照条件下培养时间为28天。

优选地，所述步骤4中移栽至栽培基质中置于温室苗床上喷雾系统下生长。

本发明具有以下有益效果：

本发明提供的一种以胚为外植体的齿叶冬青组培快繁方法，以齿叶冬青未成熟合子胚为外植体，建立了齿叶冬青植物组织快速繁殖体系，将齿叶冬青的萌发时间由常规育种的2-3年缩短为5-7周，且齿叶冬青组培苗发芽率高达100％，移栽存活率高达90％左右。

具体实施方式

实施例1

本实施例提供的一种以胚为外植体的齿叶冬青组培快繁方法，包括：