[发明专利]一种白花虎眼万年青矮化多分蘖OtDWARF53基因及应用

权利要求书

1.一种白花虎眼万年青矮化多分蘖Ot DWARF53基因，其特征在于包括：

a)SEO ID NO.1所示的核苷酸序列；

b)SEO ID NO.1所示的核苷酸序列经替换，缺失或添加碱基形成的具有同等功能的核苷酸序列。

2.一种权利要求1所述的白花虎眼万年青矮化多分蘖Ot DWARF53基因编码的蛋白。

3.如权利要求2所述的蛋白，其特征在于：其氨基酸如SEO ID NO.2所示。

4.一种含有权利要求1所述的核苷酸序列的白花虎眼万年青Ot DWARF53基因表达载体。

5.一种含有权利要求4所述的表达载体的宿主细胞。

6.一种权利要求4所述的表达载体的构建方法，其特征在于，该方法中用到的无缝连接引物包括HindIII OtDWARF53和BamHIOtDWARF53R；其核苷酸序列分别如SEO ID NO.5和SEOID NO.6所示。

7.一种Ot DWARF53基因的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、在无菌的超净工作台上，剪取白花虎眼万年青的离体叶片，放到含有细胞分裂素6BA的培养基上进行离体培养和珠芽的诱导；

步骤2、待白花虎眼万年青的离体叶片上产生珠芽后，剪取珠芽并提取其RNA，并反转录获得cDNA模板；

步骤3、对cDNA模板进行PCR扩增，获得OtDWARF53基因编码区PCR产物；所述PCR扩增的引物包括OtDWARF53F和OtDWARF53R，其核苷酸序列分别如SEO ID NO.3和SEO ID NO.4所示；对OtDWARF53基因编码区PCR产物连接到T载体中，将其转入大肠杆菌感受态中，涂布平板，37℃倒置培养后挑取单克隆进行PCR鉴定及测序，得到核苷酸序列如SEO ID NO.1所示的OtDWARF53基因，其所编码的氨基酸序列如SEO ID NO.2所示；

步骤4、从pHB植物表达载体上多克隆酶切位点筛选出HindIII和BamHI两个酶切位点用于目的基因植物表达载体的构建，同时根据目的基因的完整开发阅读框架的起始密码子和终止密码子来设计目的基因的上下游特异引物，并分别在其5，端添加根据选取的这两个酶切位点及其相连的碱基序列，从而完成用于植物表达载体构建的两条无缝连接引物包括HindIII OtDWARF53和BamHIOtDWARF53R，其核苷酸序列分别如SEO ID NO.5和SEO ID NO.6所示；用上述两条引物对已经获得的cDNA模板进行PCR扩增，随后对获得的PCR产物进行回收和纯化处理；

步骤5、对pHB植物表达载体上进行HindIII和BamHI双酶切使其线性化，按照无缝融合试剂盒的要求和步骤，对线性化后的pHB植物表达载体和纯化后的PCR产物在PCR上进行连接操作， 并将连接后的产物转化大肠杆菌及涂板和进行抗性筛选，随后挑取单菌落并摇菌，最后进行测序和酶切鉴定分析以确定植物表达载体构建成功。

8.权利要求1所述的白花虎眼万年青OtDWARF53基因调控植物侧芽腋芽以及株型发育中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于：所述植物为鳞茎球根花卉。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于：所述鳞茎球根花卉为白花虎眼万年青。