[发明专利]一种检测前列腺特异性抗原的夹心型电化学免疫传感器的制备及使用方法

说明书

本发明涉及生物领域，具体涉及一种检测前列腺特异性抗原的夹心型电化学免疫传感器的制备及使用方法。本发明通过在电极表面依次修饰上金纳米粒子负载的具有较好导电性的聚多巴胺和氮化硼复合物(Au@PDA@BCN)和对信号分子亚甲基蓝(MB)具有优良富集作用的金铂纳米粒子修饰的二氧化锰共价有机框架复合材料(AuPt@MnO2@TFPB‑COF)；通过两种材料实现对电化学信号的放大效果，所构建的使用肽和抗体的夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器实现了精确定量检测前列腺特异性抗原的目的。

技术领域

本发明涉及生物领域，具体涉及一种检测前列腺特异性抗原的夹心型电化学免疫传感器的制备及使用方法。

背景技术

前列腺癌是男性癌症的主要组成之一，在美国，也有成千上万的男性死于前列腺癌，因此前列腺癌也受到了各界的广泛关注。到目前为止，前列腺癌并没有彻底根治的方法，而解决这一问题的最佳方法就是先前的诊断。前列腺特异性抗原，是一种与血清中的前列腺癌相关的重要蛋白质，也已经被证实是前列腺癌的最有效的标志物。当前列腺特异性抗原的浓度高于4.0ng/mL时(人体中前列腺特异性抗原的国际认可水平)，患前列腺癌的风险将会大大增加。而且，前列腺特异性抗原的值还显示了患者对前列腺切除手术的反应。术后患者的前列腺特异性抗原的浓度超过0.5ng/mL时也会增大患癌风险。因此，前列腺特异性抗原的超灵敏检测对于前列腺癌的早期诊断和检测治疗至关重要。

现在常用的检测前列腺特异性抗原的方法，例如化学发光法，荧光法和质谱免疫测定法，通常都需要配备精密分析仪器的大型实验室，需要复杂的操作和大量的等待时间。尽管酶联免疫吸附测定能够在2小时内同时检测96个样品，但基于酶的生物传感器很容易受到环境、生物酶固定和纯化程序复杂以及成本高等因素的限制，因此，开发出一种具有简单，快速，便宜和超灵敏性的卓越传感器就显得尤其重要。

而现在常用的夹心型电化学免疫传感器都是基于抗体和抗原的特异性结合，但是抗体的生产周期长，价格昂贵。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测前列腺特异性抗原的夹心型电化学免疫传感器的制备及使用方法，以解决现有的对于前列腺特异性抗原的检测成本高、灵敏度低、稳定性差等问题。

为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种检测前列腺特异性抗原的夹心型电化学免疫传感器的制备方法：包括以下步骤：

(1)玻碳电极的处理：将玻碳电极清洗干净；

(2)将金纳米粒子负载聚多巴胺和氮化硼复合物的纳米材料分散液滴加至步骤(1)中清洗干净的玻碳电极表面，晾干；

(3)将前列腺特异性抗体滴加到步骤(2)处理好的玻碳电极表面，进行孵育，孵育完成后用磷酸盐缓冲液清洗电极表面，晾干；

(4)将牛血清蛋白溶液滴加到步骤(3)处理好的玻碳电极表面，进行孵育，孵育完成后用磷酸盐缓冲液清洗电极表面，晾干；

(5)将前列腺特异性抗原溶液滴加到步骤(4)处理好的电极表面，进行孵育，孵育完成后用磷酸盐缓冲液清洗电极表面，晾干；

(6)将肽的生物共轭探针滴加到步骤(5)处理好的电极表面，进行孵育，孵育完成后用磷酸盐缓冲液清洗电极表面，晾干，得到检测前列腺特异性抗原的夹心型电化学免疫传感器。

作为优选，所述的步骤(1)中，玻碳电极的处理具体为：将玻碳电极用的Al₂O₃抛光粉抛光，然后分别用硝酸溶液、乙醇溶液、超纯水超声清洗。

作为优选，所述的步骤(2)金纳米粒子负载聚多巴胺和氮化硼复合物的纳米材料分散液的制备方法具体包括以下步骤：