[发明专利]一种神经母细胞瘤肾上腺原位移植瘤动物模型的构建方法

说明书

本发明提供了一种神经母细胞瘤肾上腺原位移植瘤动物模型的建立方法，包括以下步骤：（1）动物筛选；（2）神经母细胞经胰酶消化、稀释，制得细胞悬液（3）动物背部切口，将细胞悬液注射入肾上腺周围脂肪处。与传统异位皮下移植的肿瘤相比，本发明的方法的成瘤率更高，达100%、肿瘤生长速度明显加快，移植瘤在相同时间点明显大于异位移植瘤，肿瘤组织HE染色提示本发明移植瘤肿瘤组织较传统皮下异位移植瘤肿瘤细胞密度更大；且本发明的方法避免从腹部开口进行手术，避免在腹部开口下对腹腔脏器的影响，并且解决了脾脏遮挡肾上腺造成的手术难度问题，有效的减少了操作难度。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种神经母细胞瘤肾上腺原位移植瘤动物模型的建立方法。

背景技术

神经母细胞瘤(Neuroblastoma，NB)是儿童常见的一种交感神经系统的恶性胚源性肿瘤，其起源于神经嵴，恶性度极高，预后极差，但具有自行消退和体外诱导分化成熟的特点。对于如何更好的治愈NB是目前肿瘤界研究的焦点问题，而动物模型是肿瘤疾病临床前研究的重要组成部分，其中小鼠移植瘤模型可模拟人肿瘤自然生长过程，是目前最主流的研究NB的动物模型。移植瘤模型可分为异位移植和原位移植模型，约60％的神经母细胞瘤原发于腹膜后，来源于肾上腺髓质或交感神经节，因此异位移植瘤模型并不能完全模拟神经母细胞瘤的生物学行为，而原位移植瘤模型在生物学特性上更贴近临床实际，因此，建立肾上腺原位移植NB动物模型的造模方法，对未来进一步研究NB发生、发展及治疗具有重要影响。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种神经母细胞瘤肾上腺原位移植瘤动物模型的建立方法，通过该方法建立的神经母细胞瘤肾上腺原位移植瘤动物模型，具有成瘤率更高，肿瘤生长速度明显加快，移植瘤在相同时间点更大的优势。

一种神经母细胞瘤肾上腺原位移植瘤动物模型的建立方法，包括以下步骤：

(1)动物筛选；

(2)神经母细胞经胰酶消化、稀释，制得细胞悬液；

(3)动物背部切口，将细胞悬液注射入肾上腺周围脂肪处。

所述动物为小鼠。

所述动物筛选过程中，需选用SCID-Beige免疫缺陷小鼠，雌性，5周龄，体重14-16g。

所述细胞悬液的制备方法，包括以下步骤：肿瘤细胞接种实验当天将BE2细胞用胰酶消化后，按照PBS：Matrigel＝1：1的比例稀释BE2细胞，制成2×10⁶/50μl/只的细胞悬液。

所述(3)中，具体包括以下步骤：小鼠左侧背部备皮消毒，左侧背部肋缘下开1cm左右切口，将细胞悬液50微升注射到肾上腺周围脂肪层内，缝合消毒。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

(1)本发明的神经母细胞瘤肾上腺原位移植瘤动物模型的建立方法，不同于传统皮下异位肿瘤移植模型，而是体外培养人神经母细胞瘤细胞，然后接种于小鼠背部，并分别在肿瘤细胞接种后第14天、21天、28天取瘤组织；与传统异位皮下移植的肿瘤相比，本发明的方法的成瘤率更高，达100％、肿瘤生长速度明显加快，移植瘤在相同时间点明显大于异位移植瘤，肿瘤组织HE染色提示本发明移植瘤肿瘤组织较传统皮下异位移植瘤肿瘤细胞密度更大。

(2)本发明同时提供了另一种神经母细胞瘤肾上腺原位开腹接种动物模型的建立方法(开腹接种)，体外培养人神经母细胞瘤细胞，然后开腹接种于小鼠左侧肾上腺周围脂肪内，并分别在肿瘤细胞接种后第14天、21天、28天取瘤组织；实验结果表明，开腹开口接种相对于背部开口接种，小鼠脾脏会遮挡实验操作视线，而且脾脏质地较脆且易出血，不宜过多触碰；而背部接种时开口位置更便于细胞注射，可直接找到肾上腺周围脂肪层，注射细胞时不会影响腹腔其他脏器。