[发明专利]GBM-7S(α1)-NC1(α3)融合蛋白及其制备方法有效
| 申请号： | 202010005424.2 | 申请日： | 2020-01-03 |
| 公开（公告）号： | CN111087477B | 公开（公告）日： | 2021-10-08 |
| 发明（设计）人： | 杨滨;王丽;高雪丹;黄卓春;张君龙;胡静 | 申请（专利权）人： | 四川大学华西医院 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/866;C12N5/10;C07K16/18 |
| 代理公司： | 北京超成律师事务所 11646 | 代理人： | 董佳 |
| 地址： | 610000 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | gbm nc1 融合 蛋白 及其 制备 方法 | ||
1.一种GBM-7S(α1)-NC1(α3)融合蛋白，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.编码权利要求1所述的GBM-7S(α1)-NC1(α3)融合蛋白的核苷酸片段。
3.根据权利要求2所述的核苷酸片段，其特征在于，所述核苷酸片段还包括编码信号肽序列的核苷酸片段。
4.根据权利要求3所述的核苷酸片段，其特征在于，所述信号肽序列为GP67信号肽序列，所述GP67信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
5.根据权利要求2-4任一项所述的核苷酸片段，其特征在于，所述核苷酸片段还包括编码蛋白标签的核苷酸序列。
6.根据权利要求5所述的核苷酸片段，其特征在于，所述蛋白标签为6his-tag标签。
7.含有权利要求2-6任一项所述的核苷酸片段的重组载体。
8.根据权利要求7所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为克隆载体或表达载体。
9.含有权利要求2-6任一项所述的核苷酸片段的细胞系。
10.根据权利要求9所述的细胞系，其特征在于，所述细胞系为昆虫细胞。
11.根据权利要求10所述的细胞系，其特征在于，所述昆虫细胞为sf9细胞或High Five细胞。
12.一种GBM-7S(α1)-NC1(α3)融合蛋白的制备方法，其特征在于，将载体与权利要求2-6任一项所述的核苷酸片段构建得到的重组载体，转染昆虫细胞后进行蛋白表达，得到GBM-7S(α1)-NC1 (α3)融合蛋白。
13.根据权利要求12所述的制备方法，其特征在于，所述核苷酸片段的制备方法包括：
（a）对人COL4α1基因的7S结构域进行PCR扩增得到PCR产物；
（b）对人COL4α3基因的NC1结构域进行PCR扩增得到PCR产物；
（c）将（a）中的PCR产物与（b）中的PCR产物连接得到核苷酸片段。
14.根据权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述（a）中PCR产物去除编码氨基酸1-27位的信号肽的核苷酸序列，在5’端加上编码GP67信号肽的核苷酸序列。
15.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于，所述（b）中PCR产物，在3’端加上编码6his-tag标签的核苷酸序列。
16.根据权利要求12所述的制备方法，其特征在于，所述载体为表达载体。
17.根据权利要求16所述的制备方法，其特征在于，所述载体为pFastBac1质粒。
18.根据权利要求12-17任一项所述的制备方法，其特征在于，所述昆虫细胞为sf9细胞或High Five细胞。
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