[发明专利]一种鲤冠状病毒HL39及RT-PCR检测引物及应用

说明书

本发明属于病毒检测领域，具体公开了一种鲤冠状病毒HL39及RT‑PCR检测引物及应用，发明人首次从鲤鱼中分离出了一种鲤冠状病毒，该病毒为鲤冠状病毒（Cyprinid Nidovirus,CyNV）HL39，该病毒已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO：V201988。针对该病毒序列设计引物，F：5'‑CCTCTTGACCCAAGACGGTT‑3'，R：5'‑CCGGTGGTTGAGAGCTTGTA‑3'，可对鲤冠状病毒进行检测，该引物的特异性好，灵敏度高。

技术领域

本发明属于病毒分子检测技术领域，具体涉及一种鲤冠状病毒HL39及RT-PCR检测引物及应用。

背景技术

套式病毒目(Nidovirales)于1996年首次由国际病毒分类委员会(InternationalCommittee on Taxonomy of Viruses,ICTV)提出，该目病毒宿主广泛，可引起哺乳动物、鸟类、爬行动物、鱼虾等水生动物多种重大疾病。套式病毒目冠状病毒科是一类线形单股正链RNA病毒，最早于1937年从鸡身上分离出来，Almeida等对这些病毒进行了形态学研究，电子显微镜观察发现这些病毒的包膜上有形似日冕的棘突，故提出命名这类病毒为冠状病毒^[1]。1975年，国际病毒命名和分类委员会正式命名了冠状病毒科。由冠状病毒科的严重急性呼吸综合征病毒(SARS-CoV)引起的非典型性肺炎，世界上有30多个国家和地区相继报道出现病例，病死率超过10％。2012年，中东地区开始出现新型冠状病毒，病死率超过50％，引起了世界范围的广泛关注，造成社会对冠状病毒的恐慌。因此，对冠状病毒进行深入研究具有重要意义。

2018年ICTV调整了套式病毒目的分类，新增了Abyssoviridae、Medioniviridae、Mononiviridae、Euroniviridae和Tobaniviridae等5个病毒科，其中在Tobaniviridae科下新增Oncotshavirus属。2017年，申请人发表了鲫冠状病毒的相关研究成果，目前鲤冠状病毒(Cyprinid Nidovirus,CyNV)尚无公开报道，更也无有效的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种鲤冠状病毒HL39，所述的病毒分离自鲤鱼病变组织，该病毒已于2019年11月26日送至中国典型培养物保藏中心进行保藏，分类命名：鲤冠状病毒(Cyprinid Nidovirus)HL39，保藏编号：CCTCC NO：V201988，地址：中国武汉武汉大学。

本发明的另一个目的在于提供了基于鲤冠状病毒HL39的全序列(SEQ ID NO.1所示)与其他病毒的全序列的差异设计的引物，利用该引物可用于检测鲤冠状病毒HL39。

本发明的还有一个目的在于提供一种鲤冠状病毒HL39 RT-PCR检测引物，所述的引物为F：5'-CCTCTTGACCCAAGACGGTT-3'，R：5'-CCGGTGGTTGAGAGCTTGTA-3'。

本发明还有一个目的在于提供了鲤冠状病毒HL39的应用，所述的应用包括利用该病毒制备成鲤冠状病毒病疫苗，或是制备成鲤冠状病毒的实验室对照品。

本发明的最后一个目的在于提供一种鲤冠状病毒HL39 RT-PCR检测引物的应用，包括利用所述的应用制备成鲤冠状病毒检测试剂盒。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

一种鲤冠状病毒HL39，所述的病毒分离自鲤鱼病变组织，该病毒已于2019年11月26日送至中国典型培养物保藏中心进行保藏，分类命名：鲤冠状病毒(CyprinidNidovirus)HL39，保藏编号：CCTCC NO：V201988，地址：中国武汉武汉大学。