[发明专利]细胞培养物澄清的方法

权利要求书

1.一种用于澄清包含所关注生物分子并且浊度介于约1000NTU与约6000NTU之间的细胞培养物的方法，所述方法的特征在于包括：(a)一级澄清步骤，所述一级澄清步骤去除大小等于或大于约0.2μm的细胞培养材料；以及(b)包括过滤的二级澄清步骤，所述二级澄清步骤去除大小等于或小于4μm的细胞培养材料，其中所述二级澄清步骤的最大通量等于或大于约80L/m²，并且其中所述一级澄清步骤和所述二级澄清步骤使得浊度降低等于或大于约90％。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述一级澄清选自包括深度过滤、离心和絮凝的组。

3.根据权利要求1和2所述的方法，其中所述一级澄清是通过排除范围介于约0.25μm与约30μm之间的第一深度过滤器执行的深度过滤。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述第一深度过滤器的排除范围介于约5μm与约30μm之间，或介于约0.5μm与约10μm之间。

5.根据权利要求1和2所述的方法，其中所述一级澄清是在介于约500G与约3000G之间的相对离心场下执行的持续介于1分钟与10分钟之间的时间的离心。

6.根据权利要求1和2所述的方法，其中所述一级澄清是用絮凝剂执行的絮凝，所述絮凝剂选自包括磷酸钙、辛酸、二价阳离子或带正电的聚合物，如聚胺、壳聚糖或聚二烯丙基二甲基氯化铵的组并且以约0.03v/v％的百分比添加到所述细胞培养物中。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述二级澄清通过排除范围等于或小于约3.5μm的第二深度过滤器执行。

8.根据权利要求3到7所述的方法，其中当所述细胞培养物的浊度小于约3000NTU时，所述最大通量等于或大于约250L/m²，并且所述浊度降低等于或大于约99％。

9.根据权利要求4和7所述的方法，其中当所述细胞培养物的浊度等于或大于约3000NTU时，所述最大通量等于或大于约80L/m²，并且所述浊度降低等于或大于约99％。

10.根据权利要求1所述的方法，其中当所述细胞培养物的所述浊度小于3000NTU时，所述一级澄清步骤和所述二级澄清步骤通过排除范围介于约1μm与约20μm之间的单过滤器执行，所述最大通量等于或大于110L/m²，并且所述浊度降低等于或大于约98％。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一级澄清前面是声波分离的细胞培养物预处理步骤。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其包括(c)生物负载降低步骤，所述生物负载降低步骤通过一个或多个排除范围等于或小于0.5μm的无菌过滤器执行，以获得包括所述所关注生物分子的经澄清细胞培养物。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其包括在所述二级澄清之后通过排除范围等于小于0.2μm的膜吸收器执行的另外的过滤步骤。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括步骤(d)使所述经澄清细胞培养物经受所述所关注生物分子的一个或多个纯化步骤。

15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞。

16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述所关注生物分子是抗体或其抗体片段。

17.一种细胞培养物，其经受根据前述权利要求中任一项所述的方法。

18.一种产生药物物质的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)在细胞培养基中接种表达所关注生物分子的细胞；

(ii)将所述细胞培养介于10天与18天的时间段，优选地培养14天；

(iii)使所获得细胞培养物经受根据权利要求1到13所述的澄清方法；

(iv)向根据权利要求14纯化的所述所关注生物分子添加赋形剂。