[发明专利]包含胚胎型成红细胞的细胞群体及其制备方法、细胞培养组合物以及化合物试验方法

说明书

本发明提供包含胚胎型成红细胞的细胞群体的制备方法，所述方法包括：悬浮培养多潜能干细胞、形成细胞聚集体的步骤(1)，以及从前述步骤(1)中得到的细胞聚集体得到前述细胞群体的步骤(2)，前述步骤(2)包括贴壁培养前述细胞聚集体的步骤(2a)。另外，提供包含胚胎型成红细胞的细胞群体、以及包含该细胞群体的细胞培养组合物、以及应用包含胚胎型成红细胞的细胞群体的化合物试验方法。

技术领域

本发明涉及包含胚胎型成红细胞的细胞群体及其制备方法，以及包含该细胞群体的细胞培养组合物。进一步地，本发明涉及应用该细胞群体的化合物试验方法。

背景技术

在化合物的发育毒性试验中，已知抑制血红蛋白合成等抑制红细胞的功能的化合物抑制胎儿生长并具有致畸性、胚胎致死作用。另外，已知与红细胞的氧运输能力有关的珠蛋白基因的转换现象，其中，伴随个体发育，基因的表达依次变换为胚胎型、胎儿型和成人型。

因此认为，为了在体外试验系统中评价化合物具有的红细胞功能的抑制所引起的致畸性，使用作为致畸性的临界期的血细胞的胚胎型成红细胞进行评价是正确且有效的。

在非专利文献1(Fujita A.et al.Stem Cells.2016Jun；34(6)：1541-52.)中，记载了从人的胚胎干细胞以及人工多潜能干细胞经由表达ε-珠蛋白的成红细胞制备高表达β-珠蛋白的成红细胞的方法。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1:Fujita A.et al.Stem Cells.2016Jun；34(6)：1541-52。

发明概述

发明要解决的课题

但是，非专利文献1中记载的方法需要熟练的技术，作为制备包含表达ε-珠蛋白的胚胎型成红细胞的细胞群体的方法，再现性并不能说一定是足够的。本发明的目的是提供再现性良好地从多潜能干细胞制备包含胚胎型成红细胞的细胞群体的方法、以及能够通过该制备方法得到的细胞群体、以及包含该细胞群体的细胞培养组合物。另外，本发明的目的是提供应用该包含胚胎型成红细胞的细胞群体的化合物试验方法。

用于解决课题的方法

本发明提供以下示例的包含胚胎型成红细胞的细胞群体以及其制备方法、细胞培养组合物以及化合物试验方法。

[1]包含胚胎型成红细胞的细胞群体的制备方法，其包括：

悬浮培养多潜能干细胞、形成细胞聚集体的步骤(1)，以及

从前述步骤(1)中得到的细胞聚集体得到前述细胞群体的步骤(2)，

其中，前述步骤(2)包括贴壁培养前述细胞聚集体的步骤(2a)。

[2]根据[1]所述的制备方法，其中，前述步骤(2)进一步包括回收前述细胞群体的步骤(2b)。

[3]根据[1]或[2]所述的制备方法，其中，在构成前述细胞群体的细胞之中，至少70％的细胞是前述胚胎型成红细胞。

[4]根据[1]～[3]中任一项所述的制备方法，其中，在前述细胞群体中，在细胞表达的β珠蛋白基因家族之中，至少50％是ε-珠蛋白基因。

[5]根据[1]～[4]中任一项所述的制备方法，其中，应用细胞非粘附性的培养器材进行前述步骤(1)。

[6]根据[1]～[5]中任一项所述的制备方法，其中，应用细胞粘附性的培养器材进行前述步骤(2a)。

[7]根据[6]所述的制备方法，其中，前述细胞粘附性的培养器材用基膜制剂包被。