[发明专利]双特异性和多特异性生物制剂的区室化测定法

说明书

本公开的实施方案通常涉及在以微流体液滴和微室为代表的区室化纳米体积中进行测定法。在一些实施方案中，提供了用于在区室化纳米体积中筛选双特异性或多特异性生物制剂的方法，对所述区室化纳米体积基本上提供至少两种不同细胞类型中每一种的一个细胞，其中工程化改造第一细胞以表达所述生物制剂的单一变体，其中第二细胞产生在表达和分泌功能性生物制剂时被触发的报告物信号，从而允许检测和回收与阳性报告物信号相对应的细胞，用于所述生物制剂的相应功能性变体的随后遗传鉴定。

对相关申请的交叉引用

本国际申请要求享有于2018年12月21日提交的美国临时专利申请序列号67/784,171和于2018年10月8日提交的美国临时专利申请序列号67,742/837的优先权权益，其内容通过引用以其整体并入本文。

技术领域

本公开涉及基于区室化纳米体积的生物测定法的各种实施方案，更具体地，涉及用于一般应用(特别是治疗用途)的双特异性和多特异性生物制剂的基于微流体液滴或微室的测定法。

发明背景

双特异性和多特异性生物制剂是能够与包括配体和受体在内的相同或不同靶标的至少两个分子位点接合的单一生物分子。实例包括双特异性抗体(BsAbs)，免疫细胞因子(即，抗体部分与细胞因子部分的融合物)和嵌合细胞因子，作为用于双重或多价靶向策略的新颖且日益重要的方法。一些BsAb可能对疾病治疗有用。

通常，可使用多步骤方法通过两个或更多个功能部分(或亚基)的合理或随机配对或组装来筛选双特异性或多特异性生物制剂，其中生物制剂的单个部分在细胞中或体外共表达和组装，分别体外测试所得到的各自代表生物制剂变体的单个组装体的靶标结合或功能活性。可选择地，将单个组装体展示在细胞表面上并进行结合测定法，其中阳性结合物经选择、克隆、进一步表达并用功能验证测定法进行筛选。

随着临床开发的进展，对创新而稳健的平台技术存在日益增长的需求，以能够高效筛选功能活性的双特异性抗体，以及更广泛的双特异性和多特异性生物制剂。

发明概述

以下发明内容仅是说明性的，而无意于以任何方式进行限制。换言之，提供以下概述以介绍本文所述的系统、方法、技术和设备的新颖且非显而易见的实施方案的概念、重点、益处和优点。下面的详细描述中进一步描述选择的实现。因此，以下概述既不旨在标识所要求保护主题的必要特征，也不旨在用于确定所要求保护主题的范围。

一些实施方案利用结合细胞工程和生物学测定法的微流体技术。根据一些实施方案，本文提供的方法避免了在常规测定方法中对双特异性或多特异性生物制剂的单个部分的偏向选择的问题。纳米体积液滴或微室的使用还允许从大量候选物中更深入且有效地在单细胞水平筛选功能性生物制剂，而无需大的样品体积。

在一些实施方案中，本文提供了用于在区室化纳米体积中筛选双特异性或多特异性生物制剂的方法。在一些实施方案中，给各个区室化纳米体积基本上提供了至少两种不同类型细胞，其中工程化改造第一类型细胞以表达所述生物制剂的每个细胞的单一变体，其中选择第二细胞以在功能性双特异性或多特异性生物制剂触发时产生报告物信号，其中所述第一细胞和第二细胞中至少一种伴随表达所述生物制剂的一个或多个不同细胞表面靶标。功能性生物制剂的适当表达、组装和分泌及其与意图分子靶标的相互作用在纳米体积内产生阳性报告物信号，从而允许检测和回收表达生物制剂的细胞，并随后遗传鉴定所述生物制剂的相应功能性变体。