[发明专利]AAV三质粒系统

权利要求书

1.一种用于重组腺相关病毒载体rAAV产生的质粒系统，其包括：

(i)含转基因质粒，其包括由5'和3'AAV反向末端重复序列ITR侧接的至少一种异源核酸和在所述ITR外部的填充序列；

(ii)质粒，其包括AAV复制(Rep)和衣壳(Cap)基因序列；和

(iii)腺病毒(Ad)辅助质粒。

2.根据权利要求1所述的质粒系统，其中所述填充序列增加含转基因质粒骨架的大小，使得所述含转基因质粒不包装到rAAV衣壳中。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的质粒系统，其中所述含转基因质粒的所述骨架大于野生型AAV基因组。

4.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的质粒系统，其中所述填充序列不含增强子、启动子、剪接调节子、非编码RNA、反义序列、编码序列，或其任何组合。

5.根据权利要求4所述的质粒系统，其中所述填充序列不含增强子、启动子、剪接调节子、非编码RNA、反义序列和编码序列。

6.根据权利要求1至5中任一权利要求所述的质粒系统，其中所述填充序列包括发现于人类基因组中的惰性内含子DNA序列。

7.根据权利要求1至6中任一权利要求所述的质粒系统，其中所述填充序列包括长度在1000与5000个核苷酸之间的核酸序列，或长度在1000与2000个核苷酸之间的核酸序列。

8.根据权利要求1至7中任一权利要求所述的质粒系统，其中所述填充序列包括GAPDH内含子2、其片段或突变体。

9.根据权利要求1至8中任一权利要求所述的质粒系统，其中所述填充序列包括与SEQID NO:9具有至少约40％、约50％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％一致性的核酸。

10.根据权利要求1至9中任一权利要求所述的质粒系统，其中所述填充序列由与SEQID NO:9具有至少约40％、约50％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％一致性的核酸组成。

11.根据权利要求1至8中任一权利要求所述的质粒系统，其中所述填充序列包括SEQID NO:9或其片段。

12.根据权利要求1至8中任一权利要求所述的质粒系统，其中所述填充序列由SEQ IDNO:9或其片段组成。

13.根据权利要求1至12中任一权利要求所述的质粒系统，其中所述含转基因质粒包括具有与图3A呈相同次序的结构的质粒，其中eGFP和SEAP转基因能够被所述至少一种异源核酸置换。

14.根据权利要求1至12中任一权利要求所述的质粒系统，其中所述含转基因质粒包括具有与图3B呈相同次序的结构的质粒，其中eGFP转基因能够被所述至少一种异源核酸置换。

15.根据权利要求1至12中任一权利要求所述的质粒系统，其中所述含转基因质粒在5'到3'的方向上包括以下核酸序列：SEQ ID NO:2、4、至少一种异源核酸、8、3和所述填充序列，其中各核酸序列能够被以下取代或编码以下：对应功能片段或其衍生物，或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致性的序列。