[发明专利]新型CAS12B酶和系统

权利要求书

1.一种非天然存在的或工程化的系统，所述系统包含

i)来自表1或表2的Cas12b效应蛋白，和

ii)包含能够与靶序列杂交的指导序列的指导物。

2.如权利要求1所述的系统，其中所述Cas12b效应蛋白来源于选自由以下组成的组的细菌：卡克氏脂环酸芽孢杆菌、芽孢杆菌属V3-13种、外村尚芽孢杆菌、黏胶球形菌纲细菌和沉积物莱西氏菌。

3.如权利要求1所述的系统，其中tracr RNA在正向重复序列的5'端与crRNA融合。

4.如权利要求1所述的系统，所述系统包含两个或更多个能够使两个不同靶序列或同一靶序列的不同区域杂交的指导序列。

5.如权利要求1所述的系统，其中所述指导序列与原核细胞中的一个或多个靶序列杂交。

6.如权利要求1所述的系统，其中所述指导序列与真核细胞中的一个或多个靶序列杂交。

7.如权利要求1所述的系统，其中所述Cas12b效应蛋白包含一个或多个核定位信号(NLS)。

8.如权利要求1所述的系统，其中所述Cas12b效应蛋白是无催化活性的。

9.如权利要求1所述的系统，其中所述Cas12b效应蛋白与一个或多个功能结构域相缔合。

10.如权利要求9所述的系统，其中所述一个或多个功能结构域切割一个或多个靶DNA序列。

11.如权利要求10所述的系统，其中所述功能结构域修饰所述一个或多个靶序列的转录或翻译。

12.如权利要求1所述的系统，其中所述Cas12b效应蛋白与一个或多个功能结构域相缔合；并且所述Cas12b效应蛋白在RuvC和/或Nuc结构域内含有一个或多个突变，由此所形成的CRISPR复合物能够在靶序列处或其附近递送表观遗传修饰子或者转录或翻译激活或阻遏信号。

13.如权利要求1所述的系统，其中所述Cas12b效应蛋白与腺苷脱氨酶或胞苷脱氨酶相缔合。

14.如权利要求1所述的系统，所述系统还包含重组模板。

15.如权利要求14所述的系统，其中所述重组模板通过同源性定向修复(HDR)而被插入。

16.如权利要求1所述的系统，所述系统还包含tracr RNA。

17.一种Cas12b载体系统，所述Cas12b载体系统包含一个或多个载体，所述载体包含：

第一调控元件，所述第一调控元件可操作地连接至编码来自表1或表2的Cas12b效应蛋白的核苷酸序列，以及

i)a)第二调控元件，所述第二调控元件可操作地连接至编码指导序列的核苷酸序列，和

b)第三调控元件，所述第三调控元件可操作地连接至编码tracr RNA的核苷酸序列；或者

ii)第二调控元件，所述第二调控元件可操作地连接至编码所述指导序列和所述tracrRNA的核苷酸序列。

18.如权利要求17所述的载体系统，其中编码所述Cas12b效应蛋白的所述核苷酸序列被密码子优化以在真核细胞中表达。

19.如权利要求17或18所述的载体系统，所述载体系统包含在单个载体中。

20.如权利要求17至19中任一项所述的载体系统，其中所述一个或多个载体包括病毒载体。