[发明专利]条件性活化的结合蛋白的共表达和纯化方法

权利要求书

1.一种分离的细胞，所述分离的细胞包含

a)编码第一多肽的第一多核苷酸，所述第一多肽从N末端到C末端包含：

i)与人肿瘤靶抗原(TTA)结合的第一单结构域抗体(sdAb)；

ii)第一结构域接头；

iii)包含vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3的可变重链；

iv)包含第一蛋白酶裂解位点的第一可裂解接头；和

v)假可变轻链；以及

b)编码第二多肽的第二多核苷酸，所述第二多肽从N末端到C末端包含：

i)与人肿瘤靶抗原(TTA)结合的第二sdAb；

ii)第二结构域接头；

iii)包含vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3的可变轻链；

iv)包含第二蛋白酶裂解位点的第二可裂解接头；和

v)假可变重链；

其中所述第一多肽的所述可变重链和所述第二多肽的所述可变轻链在缔合形成Fv时将结合人CD3。

2.根据权利要求1所述的分离的细胞，其中所述第一sdAb和所述第二sdAb结合相同的人TTA。

3.根据权利要求1或2所述的分离的细胞，其中所述第一sdAb和/或所述第二sdAb结合选自由以下组成的组的人TTA：人EGFR、人B7H3、人EpCAM和人FOLR1。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的细胞，其中所述第一sdAb和所述第二sdAb包含相同的氨基酸序列。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的细胞，其中所述第一sdAb和所述第二sdAb包含不同的氨基酸序列。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的分离的细胞，其中所述第一蛋白酶裂解位点和所述第二蛋白酶裂解位点由相同的蛋白酶识别。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的分离的细胞，其中所述第一蛋白酶裂解位点和所述第二蛋白酶裂解位点由不同的蛋白酶识别。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的分离的细胞，其中所述第一多肽还在C末端包含半衰期延长结构域，且/或所述第二多肽还在C末端包含半衰期延长结构域。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的分离的细胞，其中所述可变重链包含图39的SEQID NO:102的所述vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3序列。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的分离的细胞，其中所述可变轻链包含图38的SEQID NO:90的所述vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3序列。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的分离的细胞，其中所述假可变重链包含选自由图39的SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:110和SEQ ID NO:207组成的组的任一个的假可变重链序列。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的分离的细胞，其中所述假可变轻链包含选自由图38的SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:203组成的组的任一个的假可变轻链序列。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的分离的细胞，其中所述第一多肽选自由以下组成的组：Pro16(SEQ ID NO:5)、Pro39(SEQ ID NO:9)、Pro41(SEQ ID NO:13)、Pro43(SEQ IDNO:17)、Pro45(SEQ ID NO:21)和Pro349(SEQ ID NO:25)。