[发明专利]用于改进小体积样品的免疫测定灵敏度和动力学的依次采样方法

权利要求书

1.用于检测生物样品中存在的分析物的方法，所述方法包括：

(a)提供一定体积的怀疑含有分析物的生物样品；

(b)使固体支持物与所述体积的生物样品的第一等分试样接触，其中所述固体支持物包含固定至所述固体支持物的特异性结合所述分析物的第一特异性结合成员；

(c)从所述固体支持物除去第一等分试样，并使所述固体支持物与所述体积的生物样品的第二等分试样接触；

(d)将步骤(b)和(c)重复5至30次，其中形成固体支持物/第一特异性结合成员/分析物复合物；

(e)使所述固体支持物/第一特异性结合成员/分析物复合物与第二特异性结合成员接触，所述第二特异性结合成员特异性结合所述分析物并包含与所述第二特异性结合成员附接的可检测标记物，其中形成固体支持物/第一特异性结合成员/分析物/第二特异性结合成员复合物；

(f)除去未与所述分析物结合的任何第二特异性结合成员；和

(g)通过评价由所述可检测标记物产生的信号来检测所述分析物。

2.用于检测生物样品中存在的分析物的方法，所述方法包括：

(a)提供一定体积的怀疑含有分析物的生物样品；

(b)使固体支持物与一定体积的所述生物样品接触，其中所述固体支持物包含固定至所述固体支持物的特异性结合所述分析物的第一特异性结合成员；

(c)使所述固体支持物/第一特异性结合成员/分析物复合物与第二特异性结合成员接触，所述第二特异性结合成员特异性结合所述分析物并包含与所述第二特异性结合成员附接的可分离的可检测标记物，其中形成固体支持物/第一特异性结合成员/分析物/第二特异性结合成员复合物；

(d)从与所述固体支持物结合的复合物分离和洗脱所述可检测标记物；

(e)将可检测标记物的等分试样转移至第二固体支持物，所述第二固体支持物包含特异性结合所述可检测标记物的第三特异性结合成员；

(f)从所述固体支持物除去第一等分试样，并使所述固体支持物与洗脱的可检测标记物的第二等分试样接触；

(g)将步骤(e)和(f)重复5至30次，其中形成固体支持物/第三特异性结合成员/可检测标记物复合物；

(h)除去任何未与所述固体支持物结合的可检测标记物；和

(i)通过评价由所述可检测标记物产生的信号来定量所述分析物。

3.权利要求1或2的方法，其中所述生物样品的体积为约10 μl至约50 μl。

4.权利要求1至3的方法，其中所述第一和第二等分试样包含溶液体积的约1 μl至约2μl。

5.权利要求4的方法，其中所述第一和第二等分试样包含所述溶液体积的约1 μl。

6.权利要求1至5中任一项的方法，其中所述分析物是蛋白、糖蛋白、肽、寡核苷酸、多核苷酸、抗体、抗原、半抗原、激素、药物、酶、脂质、碳水化合物、配体或受体。

7.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述第一和/或第二结合成员是抗体、受体、肽或核酸序列。

8.权利要求1至7中任一项的方法，其中所述固体支持物是颗粒、微粒、珠粒、电极、载片或多孔板。

9.权利要求8的方法，其中所述第一固体支持物是微粒，且所述第二固体支持物是载片。

10.权利要求9的方法，其中所述微粒是磁性的。

11.权利要求1至10中任一项的方法，其中所述生物样品是血液、血清、血浆、尿液、唾液、汗液、痰液或精液。

12.权利要求1至11中任一项的方法，其中所述可检测标记物包括色原、荧光化合物、酶、化学发光化合物、核酸分子或放射性化合物。