[发明专利]从人脐带中分离干细胞的方法

说明书

本发明涉及一种分离源自脐带的干细胞的方法，更具体地，涉及一种分离源自脐带的干细胞的方法，通过该方法可以从具有一定尺寸的脐带中分离大量干细胞。本发明的分离方法无需酶处理便可从脐带组织中分离干细胞，因此在显著抑制施加至细胞的胁迫压力方面具有巨大优势。此外，与通过常规分离方法分离的干细胞相比，通过本发明的分离方法分离的干细胞具有优异的细胞增殖潜力。

技术领域

本发明涉及一种分离源自脐带的干细胞的方法，更具体地，涉及一种从具有特定大小的脐带中分离大量间充质干细胞的方法。

背景技术

干细胞是可以分化为构成生物组织的多种细胞的细胞。干细胞统指可从胚胎组织、胎儿组织和成年人组织中获得的未分化的细胞。就其分化能力而言，干细胞可分为多能干细胞、专能干细胞和单能干细胞。多能干细胞具有分化为所有类型细胞的潜能，其包括胚胎干细胞(ES细胞)和诱导的多能干细胞(iPS细胞)。专能干细胞和/或单能干细胞可以是例如成年干细胞，例如造血干细胞、间充质干细胞和神经干细胞。

干细胞的利用被认为是治疗不治之症的新选择(韩国专利公开第2015-0016117号)。迄今为止，已经提出了器官移植和基因疗法来治疗不治之症，但是由于免疫排斥，器官不足或缺乏关于载体发展和疾病基因的知识，有效的实际应用仍然受到限制。

在这种情况下，人们对干细胞的研究兴趣越来越高，并且提出了利用干细胞再生器官并治疗帕金森病、糖尿病和脊髓损伤的各种可能性。

存在几种获得干细胞源的方法。最近提出了在不涉及道德问题的情况下通过iPS细胞获得成体干细胞的新可能性，但它们仍处于研究的早期阶段，并需要科学验证实际选择方案。

作为解决上述问题的方案，已经出现了利用例如骨髓和脂肪的成体干细胞源的技术。然而，干细胞难以在一定程度上分化，特别是骨髓来源和脂肪来源的间充质干细胞的连续传代会导致干细胞迅速老化。此外，老化的骨髓干细胞本身难以传代培养。换句话说，老年人或患有慢性疾病的患者的干细胞质量下降。

具体而言，发现从老年供体获得的干细胞形成集落的能力差、增殖率低且分化潜能差，从患有例如骨关节炎的慢性疾病的患者获得的干细胞与从正常群体获得的干细胞相比，其增殖能力和分化潜能下降。

患者抱怨在获取他们的干细胞时感到不适，并且由于干细胞的质量低下，大多数干细胞也无法使用。针对同种异体间充质干细胞的移植或治疗，迫切需要提供足够量的高质量干细胞，以确保快速使用干细胞并确定干细胞移植的适合性，例如，通过测试移植所必需的传染性标志物。即，常规技术在提供足够量的干细胞方面受到限制，因为它们在分离和培养干细胞中具有局限性。

分娩后丢弃的生物学废物由最年轻的细胞组成，其是成体干细胞的来源。这样的生物学废物组织包括脐带血、脐带、胎盘和羊膜。特别地，脐带血已被认为是用于治疗应用的造血干细胞的来源。但是，由于源自脐带血的间充质干细胞的分离成功率非常低，因此在保存后未从脐带血中分离间充质干细胞时可能引起许多问题。Hows等人和Wexler等人报道了不能从脐带血中分离间充质干细胞(Hows，1992；Wexler，2003；Pojda，2005；Bieback，2004)。因此，从脐带血中分离间充质干细胞的成功率不是非常高。

脐带组织已成为细胞治疗的新来源。脐带是胎儿组织，因此是可以从中获取除胚胎外的干细胞的最年轻的组织。因此，使用脐带基本上可以防止干细胞的质量由于年龄和各种疾病而变差，因此其根本的优点是可以避免胚胎干细胞和成体干细胞的缺点。特别地，报道了源自脐带的干细胞形成了大量的CFU-F、具有更快的增殖速度、且可以比骨髓来源的干细胞传代更多次(Karahuseyinoglu，2007；Lund，2007；Baksh，2007；Lu，2006)。

因此，需要开发一种从脐带中分离大量干细胞，同时尽可能保持其活性的技术。

提供背景技术的描述仅是为了更好地理解本发明的背景，而不应被认为对应于本领域技术人员已知的现有技术。