[发明专利]多核苷酸合成方法、试剂盒和系统

权利要求书

1.一种用转移核苷酸延伸多核苷酸合成分子的方法，所述方法包括延伸过程，所述延伸过程包括：使所述转移核苷酸通过纳米孔的通道从基质的顺式侧移动到反式侧，所述纳米孔安置在所述基质中；以及使所述转移核苷酸与在邻近所述纳米孔的所述基质的所述反式侧上提供的酶接触，此时所述酶催化所述转移核苷酸向所述多核苷酸合成分子转移，由此延伸所述多核苷酸合成分子。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述转移核苷酸是未封闭的核苷酸。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述转移核苷酸连接到饲养分子，并且其中所述转移核苷酸在掺入到所述多核苷酸合成分子中之前从所述饲养分子裂解。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述转移核苷酸通过所述酶裂解。

5.一种用根据权利要求1到4中任一项所述的转移核苷酸延伸多核苷酸合成分子的方法，所述方法包括：延伸过程，所述延伸过程包括：

A.提供包括纳米孔的基质，其中所述纳米孔包括允许流体从所述基质的所述顺式侧流到所述反式侧的通道；在所述基质的所述顺式侧处提供饲养分子，所述饲养分子具有连接的转移核苷酸；在邻近所述纳米孔的所述基质的所述反式侧上提供彼此接近的酶和所述多核苷酸合成分子；以及

B.使所述饲养分子移动通过所述纳米孔，以使所述连接的转移核苷酸与所述酶接触，此时所述酶催化所述转移核苷酸向所述多核苷酸合成分子转移，由此延伸所述多核苷酸合成分子。

6.根据权利要求5所述的方法，其进一步包括：

C.在所述转移核苷酸向所述多核苷酸合成分子转移之后，使所述饲养分子移动通过所述纳米孔到达所述基质的所述顺式侧或所述反式侧。

7.一种用根据权利要求1或权利要求2所述的转移核苷酸延伸多核苷酸合成分子的方法，所述方法包括：延伸过程，所述延伸过程包括：

A.提供包括纳米孔的基质，其中所述纳米孔包括允许流体从所述基质的所述顺式侧流到所述反式侧的通道；在所述基质的所述顺式侧处提供转移核苷酸；在邻近所述纳米孔的所述基质的所述反式侧上提供彼此接近的酶和所述多核苷酸合成分子；以及

B.使所述转移核苷酸移动通过所述纳米孔，以使所述转移核苷酸与所述酶接触，此时所述酶催化所述转移核苷酸向所述多核苷酸合成分子加成，由此延伸所述多核苷酸合成分子。

8.根据权利要求3到7中任一项所述的方法，其中提供具有邻近所述酶的近端和远端的所述多核苷酸合成分子，其中所述酶催化所述转移核苷酸向所述多核苷酸合成分子的所述近端加成。

9.根据权利要求3到6和权利要求8中任一项所述的方法，其中在具有不同连接的转移核苷酸的所述基质的所述顺式侧处提供饲养分子。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述基质的所述顺式侧包括饲养分子在相同反应体积中的混合物，其中所述混合物包括饲养分子的不同群体，其中群体中的每个饲养分子具有连接的相同转移核苷酸，并且其中饲养分子的所述不同群体具有连接的不同转移核苷酸。

11.根据权利要求9或权利要求10所述的方法，其中具有不同连接的转移核苷酸的饲养分子是能区分的。

12.根据权利要求11所述的方法，其中饲养分子能够提供可标识信号以唯一地标识所述连接的转移核苷酸和/或测定所述连接的转移核苷酸的完整性。