[发明专利]一种细胞诱导的方法

权利要求书

1.(-)-Blebbistatin O-Benzoate在细胞体外诱导中的应用，其中，

所述在细胞体外诱导中的应用选自： (-)-Blebbistatin O-Benzoate在体外诱导细胞转分化中的应用或(-)-Blebbistatin O-Benzoate在体外诱导细胞永生化中的应用中的任一种；

所述转分化为在体外诱导成纤维细胞转分化为脂肪细胞；

所述永生化为在体外诱导成纤维细胞转化为永生化细胞。

2.一种在体外诱导成纤维细胞转分化为脂肪细胞的方法，其包括以下步骤：将成纤维细胞培养在培养基中，在培养基中加入Myosin抑制剂和BMP4，继续培养，直至得到脂肪细胞，其中，

所述Myosin抑制剂为(-)-Blebbistatin O-Benzoate。

3.如权利要求2所述的方法，其中，所述培养基包括基础培养液、胎牛血清和脂肪诱导培养液中的任一种或几种。

4.如权利要求3所述的方法，其中，所述基础培养液包括高糖DMEM、胎牛血清和双抗，和/或，所述脂肪诱导培养液包括N2B27培养液、N2添加剂、B27添加剂、2%牛血清白蛋白、β-巯基乙醇、Glutamax、胰岛素和双抗，以及血清替代物。

5.如权利要求3或4中任一项所述的方法，其中，所述脂肪诱导培养液进一步包括A83-01和/或SB431542。

6.一种在体外诱导成纤维细胞转分化为脂肪细胞的培养基，其包括：

Myosin抑制剂、BMP4、基础培养液、胎牛血清和脂肪诱导培养液，其中，

所述Myosin抑制剂为 (-)-Blebbistatin O-Benzoate。

7.如权利要求6所述的培养基，其中，所述基础培养液包括高糖DMEM、胎牛血清和双抗，和/或，所述脂肪诱导培养液包括N2B27培养液、N2添加剂、B27添加剂、2%牛血清白蛋白、β-巯基乙醇、Glutamax、胰岛素和双抗，以及血清替代物。

8.如权利要求6或7中任一项所述的培养基，其中，所述脂肪诱导培养液进一步包括A83-01和/或SB431542。

9.一种在体外诱导成纤维细胞转化为永生化细胞的方法，其包括以下步骤：将成纤维细胞培养在培养基中，在培养基中加入Myosin抑制剂，继续培养，直至得到永生化细胞，其中，

所述Myosin抑制剂为 (-)-Blebbistatin O-Benzoate。

10.如权利要求9所述的方法，其中，所述培养基包括基础培养液、胎牛血清和永生化诱导培养液中的任一种或几种。

11.如权利要求10所述的方法，其中，所述基础培养液包括高糖DMEM和双抗，和/或，所述永生化诱导培养液包括N2B27培养液、N2添加剂、B27添加剂、2%牛血清白蛋白、β-巯基乙醇、GlutaMAX、胰岛素和双抗。

12.如权利要求10或11中任一项所述的方法，其中，所述永生化诱导培养液进一步包括KOSR、CHIR99021和A83-01中的一种或几种。

13.一种在体外诱导成纤维细胞转化为永生化细胞的培养基，其包括：

Myosin抑制剂、基础培养液、胎牛血清和永生化诱导培养液，其中，

所述Myosin抑制剂为 (-)-Blebbistatin O-Benzoate。

14.如权利要求13所述的培养基，其中，所述基础培养液包括高糖DMEM和双抗，和/或，所述永生化诱导培养液包括N2B27培养液、N2添加剂、B27添加剂、2%牛血清白蛋白、β-巯基乙醇、GlutaMAX、胰岛素和双抗。

15.如权利要求13或14中任一项所述的培养基，其中，所述永生化诱导培养液进一步包括KOSR、CHIR99021和A83-01中的一种或几种。