[发明专利]抗PD-L1抗体和IL-7融合蛋白

说明书

提供了具有通过肽接头与人IL‑7蛋白或其片段融合的PD‑L1抑制剂的融合分子。所公开的融合分子表现出协同的抗肿瘤效果。

背景技术

白细胞介素7(IL-7)是由骨髓和胸腺中的基质细胞分泌的造血生长因子。IL-7刺激多能造血干细胞分化为淋巴祖细胞。它还刺激淋巴谱系中所有细胞(B细胞、T细胞和NK细胞)的增殖。IL-7是一种对B细胞和T细胞的发育很重要的细胞因子。该细胞因子和肝细胞生长因子(HGF)形成异二聚体，其作为前祖B细胞生长刺激因子起作用。发现该细胞因子是早期T细胞发育过程中T细胞受体β(TCRβ)的V(D)J重排的辅因子。该细胞因子可以由肠上皮细胞和上皮杯状细胞局部产生，并且可以作为肠粘膜淋巴细胞的调节因子。

已经在几个I期和II期临床试验中将重组IL-7安全地施用于患者。癌症患者中IL-7的人体研究表明，施用该细胞因子可以瞬时破坏CD8⁺和CD4⁺T细胞的稳态，同时CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺T调节细胞的百分比相应降低。然而，没有观察到事实上的癌症消退。

程序性死亡配体1(PD-L1)，也称为分化簇274(CD274)或B7同源物1(B7-H1)，是40kDa的1型跨膜蛋白，其在妊娠、组织移植、自身免疫性疾病和其他疾病状态，如肝炎等特殊事件期间在抑制免疫系统中起主要作用。PD-L1与PD-1或B7.1的结合传递抑制信号，其减少淋巴结处CD8⁺T细胞的增殖，除此之外，PD-1还可以通过细胞凋亡控制外源性抗原特异性T细胞在淋巴结中的积累，所述凋亡通过基因bcl-2的下调来消除。

已经显示PD-L1的上调可以使癌症逃避宿主免疫系统。分析来自肾细胞癌患者的肿瘤标本发现，PD-L1的高肿瘤表达与肿瘤侵袭性增加和死亡风险增加相关。许多PD-L1抑制剂作为免疫肿瘤学疗法正在开发中，并且在临床试验中显示出良好的结果。

除了治疗癌症之外，PD-L1抑制还显示出治疗感染性疾病的前景。在细胞内感染的小鼠模型中，单核细胞增生李斯特菌(L.monocytogenes)诱导T细胞、NK细胞和巨噬细胞中的PD-L1蛋白表达。PD-L1阻断(例如，使用阻断抗体)导致感染小鼠的死亡率增加。阻断减少了巨噬细胞产生的TNFα和一氧化氮、减少了NK细胞产生的颗粒酶B，降低了单核细胞增生李斯特菌抗原特异性CD8 T细胞(但不是CD4 T细胞)的增殖。该证据表明PD-L1在细胞内感染中起积极的共刺激分子的作用。

概要

本公开证明，当PD-L1抑制剂通过肽接头与IL-7蛋白融合时，融合分子可以维持两种组分的结合活性。而且，所述的融合分子表现出与单独两种蛋白质的组合相当的活性。此外，使用活性降低的突变型IL-7蛋白可以实现改善的结果。

因此，根据本公开的一个实施方案，提供了一种融合分子，其包含通过肽接头与人IL-7蛋白或其片段融合的PD-L1抑制剂。在一些实施方案中，所述的肽接头具有5～100个氨基酸残基。在一些实施方案中，所述的肽接头具有10～75个氨基酸。在一些实施方案中，所述的肽接头的至少20％的氨基酸残基为选自由丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸和丝氨酸构成的群组中的氨基酸残基。在一些实施方案中，所述的肽接头的至少40％的氨基酸残基为选自由丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸和丝氨酸构成的群组中的氨基酸残基。在一些实施方案中，所述的肽接头包含选自由SEQ ID NO：1～5构成的群组中的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述的PD-L1抑制剂是诱饵PD-1蛋白，例如结合PD-L1的无活性PD-1。在一些实施方案中，所述的PD-L1抑制剂为抗PD-L1抗体或其片段。在一些实施方案中，所述的抗PD-L1抗体具有IgG、IgM、IgA、IgE或IgD的同种型。在一些实施方案中，所述的抗PD-L1抗体的片段为单链片段、Fab片段或一对Fab片段。在一些实施方案中，所述的抗PD-L1抗体为单特异性抗体或进一步具有第二特异性的双特异性抗体。在一些实施方案中，所述的抗PD-L1抗体能介导ADCC。