[实用新型]一种NTRK融合基因检测试剂盒

说明书

一种NTRK融合基因检测试剂盒。该试剂盒由无核酸酶的超纯去离子水、NTRK融合基因检测引物及探针混合物、14种NTRK融合基因阳性质粒混合物的阳性对照品、带有独立管盖的12连排PCR管并装有相同体积的数字PCR反应预混液、三张数字PCR芯片以及存有数字PCR校准文件的光盘组成。该试剂盒基于数字PCR平台并结合三引物、双探针方法检测NTRK融合基因以及NTRK非融合基因，能够简单快速高灵敏度地监控NTRK融合基因的种类及融合比率。

技术领域

本实用新型涉及一种NTRK融合基因检测试剂盒，属于生物医学核酸检测试剂盒技术领域。

背景技术

NTRK(tropomyosim-related kinase，Trk)基因包括NTRK1，NTRK2，NTRK3，分别编码原肌球蛋白相关激酶TrkA，TrkB，TrkC。三者具有高度同源性，属于神经生长因子受体，与细胞增殖、分化、代谢、凋亡等密切相关。NTRK基因与其它基因的断裂重排在多种恶性肿瘤中都有发现，其中以NTRK1、NTRK3为主。NTRK与其它基因的断裂重排产生的融合基因会组成型激活Trk蛋白，导致其下游的 PI3K/AKT、Ras/MAPK和PLCγ三条信号通路均处于活跃状态进而导致恶性肿瘤的发生。2018年12月，美国食品和药品管理局(FDA)批准的针对NTRK融合基因靶点的小分子抑制剂为拉罗替尼(Larotrectinib)； 2019年6月，恩曲替尼(entrectinib)于日本上市，用于治疗携带NTRK融合基因的晚期或复发性实体瘤患者。《NCCN临床指南：非小细胞肺癌V2.2019》新增加检测NTRK融合基因，并且推荐拉罗替尼作为NTRK融合基因阳性所导致的转移性非小细胞肺癌患者的一线治疗选择。目前针对NTRK融合基因的检测多采用免疫组化(IHC)、荧光原位杂交(FISH)、二代测序(NGS)、RT-PCR等方法。其中RT-PCR方法以其方便、简单、低成本、结果准确等优点使其应用最为广泛，针对NTRK融合基因的RT-PCR检测方法为采用不同区段的四条引物分别扩增NTRK融合基因区域和NTRK非融合基因区域并经过与相应区段的探针杂交以得到NTRK融合基因的数量、NTRK非融合基因的数量以及NTRK融合基因在全部检测目标基因数量中所占的比例等相关数据，但是此方法所得到的检测结果的重复性、稳定性、准确性都较低。

发明内容

为了克服现有的NTRK融合基因检测试剂盒检测重复性、稳定性、准确性低的问题，本实用新型提供一种NTRK融合基因检测试剂盒，该试剂盒基于数字PCR平台并结合三条引物、双探针方法在检测 NTRK融合基因数量的同时检测出NTRK非融合基因的数量，为提高NTRK融合基因的检测重复性、稳定性、准确性提供了很好的解决方案，能够简单快速高灵敏度监控NTRK融合基因的种类及融合比率。

本实用新型解决其技术问题所采用的技术方案是：试剂盒盒体由盒体顶面(1)、盒体背面(5)、盒体右侧面(9)、盒体底面(11)、盒体前面(12)、盒体左侧面(13)连接组成，盒体顶面(1)内层具有装光盘的夹层(2)、在盒体中有海绵衬托(3)、一个装有无核酸酶的超纯去离子水的1.5mL离心管(6)、一个装有NTRK融合基因检测引物及探针混合物的1.5mL离心管(7)、一个装有NTRK融合基因阳性对照品的1.5mL离心管(8)、12连排PCR管(15)、三张数字PCR芯片(17)；所述盒体顶面(1)内层具有装光盘的夹层(2)中放置一张光盘；所述光盘内存有数字PCR的校准文件；所述一个装有NTRK融合基因阳性对照品的1.5mL离心管(8)中是14种NTRK融合基因阳性质粒的混合物；所述12连排PCR管为每个PCR管带有独立的管盖(16)，并分别装有相同体积的数字PCR反应预混液。