[发明专利]一种液质联用测定血浆中氨溴索浓度的方法

说明书

本发明公开了一种液质联用测定血浆中氨溴索浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样本，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为氨溴索的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为0.4～120ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中氨溴索的浓度。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种药物的测定方法，特别涉及一种液质联用测定血浆中氨溴索浓度的方法。

背景技术

氨溴索(ambroxol)最早由德国学者于1976年首先研制并注册，1981年开始临床应用。氨溴索在我国临床的应用是从1991年开始的，临床疗效及安全性已得到临床证实。氨溴索是目前临床广泛应用的祛痰剂，适用于急、慢性呼吸系统疾病(如急、慢性支气管炎、支气管哮喘、支气管扩张、慢性阻塞性肺炎、肺结核、肺气肿、尘肺等)引起的痰液黏稠、呼吸困难。同时氨溴索也可用于手术后肺部并发症的预防性治疗和婴儿呼吸窘迫症的治疗。

盐酸氨溴索(ambroxol)为溴己新在人体内的代谢产物，化学名称为反-4[(2-氨基-3，5-二溴苯甲基)氨基]环己醇盐酸盐，是一种新的黏痰溶解药，目前已是临床上疗效肯定且应用最广泛的祛痰药物。20世纪80年代初盐酸氨溴索首次在德国上市。该药有较广泛的药理作用，包括：能刺激支气管黏液分泌，使痰液稀释，黏稠性降低；增加肺表面活性物质的生成和分泌，降低黏液与纤毛的黏附力；能激活黏液纤毛功能；由于痰液的黏稠度降低，使抗菌药物易于渗入，提高抗菌效果。

盐酸氨溴索疗效显著，毒副作用小。目前，盐酸氨溴索已是市场上作用最强和最有效安全的祛痰药。国内外已有包括片剂、胶囊、口服溶液及注射剂等多种剂型产品上市，是最常用的祛痰药物之一。

目前，现有关于氨溴索测定方法的速度、精度和灵敏度均有待提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液质联用测定血浆中氨溴索浓度的方法，该方法可提高检测的灵敏度、精度、选择性和速度。

为实现上述目的，本发明提供一种液质联用测定血浆中氨溴索浓度的方法，血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：

(1)血浆样本预处理：

血浆以K₂EDTA为抗凝剂，以氨溴索-d5为内标；于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本，加入5μL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入5μL的0.2ng/μL的内标氨溴索-d5溶液，混匀后加入500μL的乙腈，涡旋混合1min，于6℃以3000rpm离心10min，取上层清液150μL至装有350μL混合有机溶剂的另一96深孔板中，涡旋混匀，于6℃以3000rpm离心5min后作为测试样本待检测；所述混合有机溶剂为水：乙腈：甲酸按照体积比98：2：0.2混合得到的混合物；以上过程中除了涡旋和离心，其他过程均需于冰浴条件下操作；

(2)试样测定：

取10μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中氨溴索和内标氨溴索-d5的色谱峰，并据此计算所述血浆样本中的氨溴索浓度；

液相色谱测定条件为：色谱柱为Synergi^TM 4um Polar-RP柱规格为50×2mm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：甲酸按照体积百分比100：0.2混合得到的混合物；流动相B为乙腈：甲酸按照体积百分比100：0.2混合得到的混合物；洗液为乙腈：水按照体积百分比50：50混合得到的混合物；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10μL，分析时间3.0min；