[发明专利]一种沙冬青的组织培养方法

说明书

本发明提供了一种沙冬青的组织培养方法，取用沙冬青种子中的胚作为外植体，经过初代诱导培养、继代培养、生根培养和移栽，系统地研究了沙冬青外植体的选择、最佳培养条件、不同阶段的最佳培养基及栽培基质配比。经过实验，得到了沙冬青的组培中不同阶段的最佳培养基以及培养基组合，最适的培养条件及培养方式，解决了沙冬青组培过程中的褐化问题，提高组培苗成活率，降低生产成本，为实现沙冬青的工厂化生产奠定了可靠的基础。本发明操作简便，成本低廉，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于组织培养技术领域，具体而言，涉及一种沙冬青的组织培养方法。

背景技术

沙冬青(学名：Ammopiptanthus mongolicus(Maxim.ex Kom.)Cheng f.)，为豆科沙冬青属植物，属于渐危种，主要分布在我国内蒙古、宁夏、甘肃、新疆地区，蒙古国南部、中亚地区也有分布。沙冬青在荒漠地区的生态修复中具有重要的价值，拥有优秀的抗旱、耐寒、抗风、固沙的能力，其根部具有根瘤，结合菌种的施用在改善土壤方面有很好的应用，是荒漠地区防风固沙的优良选择。

但现有沙冬青种子容器育苗技术育苗周期长，出苗率低，一般仅为30～40％，通过组培扩繁技术提高沙冬青育苗成活率是解决沙冬青生态用苗的有效途径。沙冬青的组培扩繁一般包括初代诱导→继代增殖→生根培养三个时期，在沙冬青组培过程中初代诱导和继代增殖时期，褐化现象严重，导致组培苗成活率低，因此寻找每个时期的最佳培养基配方，解决组培过程中的褐化问题，提高组培苗成活率，降低生产成本，对沙冬青生态用苗工厂化、产业化极为重要。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种沙冬青的组织培养方法，解决上述技术问题，本方法过程中系统地研究了沙冬青的外植体的选择、最佳培养条件、不同阶段的最佳培养基及栽培基质配比。

本发明提供了一种沙冬青的组织培养方法，其特征在于由以下步骤组成：

步骤1：外植体取自沙冬青种子的胚；

步骤2：将外植体接种于初代诱导培养基上，诱导分化出丛生芽；

步骤3：将初代诱导的丛生芽在继代培养基上培养；将继代培养基中长势较好的苗转入生根培养基中，诱导生根；

步骤4：将上述诱导生根后的沙冬青生根苗进行移栽。

优选地，所述的初代诱导培养的条件为培养温度26±1℃，昼夜温差7～8℃，湿度50％～60％，光照强度1500Lx，夜间无需补光。

优选地，所述的继代培养条件与初代诱导培养的条件相同。

优选地，所述的生根培养条件为培养温度26±1℃，昼夜温差7～8℃，湿度50％～60％，光照强度2000Lx，夜间无需补光。

优选地，所述步骤1中取沙冬青外植体过程为：将饱满、无病虫害的沙冬青种子流水冲洗，用0.1％的升汞溶液消毒5min，无菌水冲洗3～4次，每次5min，在无菌滤纸上吸干水分，之后在超净工作台挑出沙冬青的种子胚作为再生的外植体，若种子胚较小，可在解剖镜下处理。

优选地，所述步骤3的接种过程中，丛生芽截取带侧芽(或顶芽)的0.2～0.5cm茎段，将生长点插入培养基。

优选地，所述步骤4还包括沙冬青生根后的炼苗移栽阶段，优选地栽培基质为质量比为蛭石10～30％，沙土10～30％，羊粪5～15％，草炭磷酸二铵40～60％，更为优选为蛭石20％，土20％，羊粪10％，草炭磷酸二铵50％。

优选地，所述基本培养基为WH，用3.5g/L的卡拉胶代替琼脂作固化剂，40g/L食用白糖代替蔗糖作为碳源，以自来水代替蒸馏水。

优选地，所述初代诱导培养基为WH(无KI)+NAA 0.1～0.5mg/L+6-BA0.5～1mg/L+GA 0.5mg/L+活性炭1g/L。