[发明专利]一种孔雀石绿电化学传感器

说明书

本发明公开一种孔雀石绿电化学传感器，该传感器首先合成金纳米棒，在玻碳电极表面固定壳聚糖/金纳米棒，然后加入包被原，使用牛血清蛋白(BSA)封闭未结合的活性位点。加入待测样品和孔雀石绿抗体，再加入金纳米棒标记的二抗和酶。所构建的传感器连接电化学工作站，利用酶催化底物产生电化学信号，可对水产品中孔雀石绿进行定量分析。本发明的电化学传感器具有快速、灵敏、特异、准确等优点，具有良好的推广应用前景。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，尤其涉及一种孔雀石绿电化学传感器。

背景技术

孔雀石绿(Malachite Green，MG)是三苯甲烷类化合物，自1933年起作为治疗寄生虫、细菌、真菌感染的特效药物，在水产养殖业中广泛使用。但自20世纪90年代以来，孔雀石绿及其代谢产物毒副作用才被逐步认识。孔雀石绿具有高毒性、高残留、高致癌和高致畸、致突变等副作用，对人类健康和环境造成严重危害。日本、加拿大、欧盟均规定在食用鱼等水产品中不得检出孔雀石绿，我国在2002年5月将其列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》(农业部公告193号)中。然而，由于孔雀石绿价格低廉，一些不法商贩仍在非法使用，致使孔雀石绿残留事件时有发生。从2005年起，欧盟、日本等国家和地区曾从我国进口的鳗鱼中检出孔雀石绿残留，不仅影响生态环境和人类的身心健康，还严重影响我国食品质量安全和市场竞争力。

目前对孔雀石绿分析的仪器分析方法耗时、价格昂贵、操作复杂、样品前处理时间长，对操作人员要求高，难以满足现场快速检测的要求。免疫分析方法是近年来发展起来的食品安全检测新技术，该技术可弥补仪器检测法的不足，具有高特异性和极低检测限等优点在临床、生物制药和环境化学等领域得到广泛应用，尤其适合现场筛选和大批量样品快速筛查分析。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于免疫分析法且检测灵敏度高的孔雀石绿电化学传感器及应用。

为达到以上目的，本发明采用如下技术方案。

一种孔雀石绿电化学传感器，包括：电极，其特征在于，在所述电极表面附着有壳聚糖层，在所述壳聚糖层表面附着有金纳米棒层，在所述金纳米棒层表面附着包被原层。

更为优选的是，所述包被原层的未结合位点通过BSA封闭。

更为优选的是，所述包被原层为孔雀石绿与卵清蛋白的偶联物。

更为优选的是，所述金纳米棒的长度在10-60nm之间，所述金纳米棒的宽度在5-30nm之间。

更为优选的是，所述电极为玻碳电极。

更为优选的是，所述孔雀石绿电化学传感器的制备步骤如下：1)玻碳电极分别经过不同粒径的三氧化二铝粉抛光至镜面后用去离子水冲洗玻碳电极表面，然后移入超声波水浴中清洗一段时间后，再分别用HNO₃和去离子水进行超声波清洗，清洗好的玻碳电极最后用去离子水冲洗，氮气吹干备用；2)取一定量的金纳米棒溶液加入壳聚糖斡旋震荡混匀后，滴加到经过预处理的玻碳电极表面，室温下晾干后用去离子水冲洗、氮气吹干；然后滴加包被原孵育一段时间，孵育完成后用PBST冲洗、氮气吹干；最后用BSA溶液孵育一段时间，孵育完成后用PBST冲洗电极，置于冰箱中备用。

更为优选的是，所述金纳米棒的制备方法为：1)在水浴锅中将HAuCl₄和CTAB混匀，磁力搅拌下加入经过预冷的NaBH₄剧烈搅拌，然后继续水浴一段时间获得金种子溶液；2)合成生长溶液，往烧杯中加入适量的CTAB、HAuCl₄、AgNO₃，轻微混匀，缓慢加入抗坏血酸，直至溶液变无色；3)将金种子溶液加入生长溶液中保温一段时间，得到的金纳米棒用去离子水洗净、离心后分散在去离子水中。