[发明专利]一种快速高效同时检测蔬菜中多种抗生素含量的方法

说明书

本发明属于环境污染物检测技术领域，提供了一种快速高效同时检测蔬菜中多种抗生素含量的方法，用乙腈/丙酮混合提取剂提取蔬菜样品，依次进行涡旋、超声、离心操作后，用N‑丙基二乙胺净化上清液色素，氮吹近干后用初始流动相再溶，并转移到进样小瓶待测；利用超高液相色谱仪连接三重四级杆串连质谱仪进行抗生素含量测定。本发明克服了现有蔬菜中抗生素检测方法前处理复杂、抗生素检出种类少、检出限高等不足，可为进行蔬菜中抗生素的健康风险评价提供科学依据。

技术领域

本发明属于环境污染物检测技术领域，具体涉及一种利用高效液相色谱串联质谱快速高效检测蔬菜中来自磺胺类、喹诺酮类、大环内酯类、β-内酰胺类多种抗生素的方法。

背景技术

抗生素具有预防或治疗动物疾病、以及促进动物生长的作用，被广泛应用于人类医学、牲畜饲养及水产养殖等行业。抗生素在生产及使用过程中，会通过各种途径最终排放到环境中，并且引发菌群耐药性。目前在水体、土壤和沉积物等环境介质中均有抗生素检出。土壤是抗生素在环境中重要的汇，国内相关研究表明，土壤中抗生素的检出浓度可达μg/kg到mg/kg水平。当植物在受抗生素污染的土壤中生长时，通过根部吸收的抗生素可以在植物的可食用部分积累，对人体存在潜在的暴露风险。

由于抗生素在蔬菜中的浓度水平一般较低，同时植物样品基质复杂，使得植物样品中抗生素的分析存在诸多挑战。其中，样品前处理是其分析的关键过程之一。样品常用的提取方法有超声提取法(ULE)和加速溶剂提取法(ASE)。ASE利用高温高压条件使化合物从固相样品进入到提取液中，然而过度的高温和过长的提取时间可能会使样品基质中的杂质更多地进入提取液，对后续净化或分离检测造成影响。ULE利用超声振动使样品和提取溶剂充分接触，具有费时少、提取率高、易操作的优点，其中选择合适的溶剂是提高提取效率的关键。抗生素常用的提取剂有甲醇、乙腈、丙酮等，但在提取过程中对色素也具有较强的萃取能力。固相萃取技术(SPE)是常用的净化方法之一，亲水亲脂平衡柱(HLB)是目前抗生素分析中最常用的萃取柱，其在较宽pH范围内对亲水和疏水化合物都有较强的保留能力，但其需要的净化时间较长且成本较高。由于植物基质复杂，色素等干扰物质含量较高，因此选择简单高效的前处理方法，且达到对蔬菜中抗生素的有效提取和快速定性定量成为蔬菜中抗生素检测的重点。

实验选择利用酸化的有机溶剂对样品进行超声提取之后，为了提高吸附剂对植物样品的净化效果，尝试将N-丙基二乙胺(PSA)直接加到固液离心分离后的上清液中进行净化。样品利用UPLC-MS/MS技术进行检测，干扰杂质少，检测灵敏度提高，检出限降低，可以有效测定蔬菜等植物样品中抗生素的浓度。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够快速高效检测蔬菜中多种抗生素的方法，即基于简单高效的提取和净化方法，优化色谱和质谱条件，利用高效液相色谱-三重四级杆质谱串联仪对蔬菜样品中多种抗生素进行检测，具有操作简单，样品前处理成本低，方法检出限低、灵敏度高且检测速度快的特点，可为蔬菜中抗生素的分析提供技术方法。

本发明的技术方案：

一种快速高效同时检测蔬菜中多种抗生素含量的方法，步骤如下：

(1)样品前处理

对蔬菜样品进行冷冻干燥处理，并粉碎成粉末后在-20℃条件下密封保存备用；向蔬菜样品中加入回收率内标(待测试的抗生素)，静置20-30分钟；

再添加提取溶剂，每次按照溶剂与植物样品体积/质量比为16mL/g添加，提取溶剂为体积比1：1的酸化乙腈与丙酮；按照上述添加方式，添加提取溶剂的过程重复3次，每次提取涡旋1-3分钟，超声10-30分钟，4000r/min离心1 0-30分钟，上清液混合；向上清液中添加N-丙基二乙胺(PSA)净化，控制N-丙基二乙胺与提取溶剂的质量/体积比为25mg/mL，涡旋1-3分钟，静置15-30分钟；取上清液氮吹近干，加入1mL初始流动相(A:B＝95/5v/v)重新溶解抗生素，过0.22μm滤膜，并转移到进样小瓶中待测；