[发明专利]一种检测鸡或鸭骨骼肌肌钙蛋白I的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种检测鸡或鸭骨骼肌肌钙蛋白I的胶体金免疫层析试纸条，该检测试纸条由底板、样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫组成，试纸两端设有保护膜；所述样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫依次粘贴于底板上；其中胶体金垫为吸附有胶体金标记的捕获抗体，包被膜上含有用检测抗体预包被的检测线T线，含有用羊抗兔IgG溶液预包被的质控线C线，两条线竖直平行排列；所述底板为PVC条或其它不吸水的硬质材料；所述样品垫和胶体金垫由玻璃纤维棉制成；所述吸水垫由吸水滤纸制成；所述包被膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；所述保护膜为不透明的胶膜；所述捕获抗体为鼠源单克隆抗体；所述检测抗体为兔源多克隆抗体；捕获抗体和检测抗体均由鸡或鸭骨骼肌肌钙蛋白I提取免疫抗原免疫得到；所述捕获抗体由保藏编号为CCTCC NO:C202003的杂交瘤细胞株skTnI-3E7分泌得到，该细胞株于2019年12月10日送交中国典型培养物保藏中心 (CCTCC) 保藏；所述检测抗体为抗鸡骨骼肌肌钙蛋白I多克隆抗体。

2.制备如权利要求1所述检测鸡或鸭骨骼肌肌钙蛋白I胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）制备胶体金标记的捕获抗体：

将待标记的捕获抗体溶液10000r/min 离心30min；取胶体金溶液10mL，用 0.1 mol/LK₂CO₃溶液调节胶体金溶液的pH值至8.2；取等量捕获抗体溶液，磁力搅拌下与胶体金溶液混合，室温孵育15min，10000r/min 离心30min，弃上清，将所得沉淀用每升含10g BSA、0.5g叠氮钠、浓度为0.02 mol/L的Na₂B₄O₇溶液稀释，即获得胶体金标记的捕获抗体，4℃保存备用；

（2）胶体金垫制备：按规格裁取玻璃纤维棉，将胶体金标记的捕获抗体用喷金仪均匀喷洒于玻璃纤维棉上，37℃干燥1h，密封，4℃保存备用；

（3）检测线和质控线的制备：将检测抗体放于喷金仪贮存池A，羊抗兔IgG溶液放于贮存池B，开机分别点射于膜中央，形成间距0.5cm的直线式隐形检测线和隐形质控线，自然干燥，密封，4℃保存备用；

（4）试纸条组装：将样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫按顺序依次粘贴于底板上，并在试纸条两端的表面粘贴保护膜，在切槽机上切割成试纸条。

3.权利要求1所述的胶体金层析试纸条在用于检测鸡或鸭骨骼肌肌钙蛋白I中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：

（1）样品前处理

生鲜肉类去除脂肪和结缔组织，加工肉类食品去掉肠衣，称取1g加入0.15M的NaCL溶液2ml（1:2 w/v），匀浆后用沸水加热20min，2000g离心30min；去除沉淀，上清用Whatman 1号滤纸过滤，收集滤液用于检测；

（2）用胶体金层析试纸条检测

从包装中取出所述检测鸡或鸭骨骼肌肌钙蛋白I的胶体金免疫层析试纸条，将样品端插入待测样品液中，插入深度不超过标记线，10-20秒钟取出检测试纸条，水平放置，3-5分钟观察判定检测结果，10分钟以后结果无效；

（3）结果判定

（a）阳性：如果包被膜上对应的质控区C位置显示一条棕红色线，检测区T 位置显示棕红色线，表示检测结果为阳性，说明在待测样品中含有鸡或鸭骨骼肌肌钙蛋白I；

（b）阴性：如果在包被膜上T位置不显色，在C位置显示有一条棕红色线，表示结果为阴性，说明在待测样品中不含鸡或鸭骨骼肌肌钙蛋白I；

（c）失效：当质控区C不显示出棕红色条带，则无论检测区T显示出棕红色条带与否该试纸均判为无效。