[发明专利]一种高效液相-质谱法检测亚精胺含量的方法

说明书

本发明公开了一种高效液相‑质谱法检测亚精胺含量的方法：将待测样品加入提取溶液中，研磨匀浆，于20℃、20KHz超声提取15min，离心，吸取上清，即为上样样品；所述提取溶液为体积比1:1的乙腈和水；将上样样品进行高效液相‑质谱检测，获得亚腈胺峰面积，然后根据亚腈胺标准曲线，获得待测样品中亚腈胺含量。本发明检测浓度50～800ng/mL亚精胺具有良好的线性关系(R＞0.99)，准确度高(高中低浓度90.2％～115％)，方法选择性、残留、稀释可靠性及基质效应均符合要求。

技术领域

本发明涉及一种多胺类物质亚精胺的分离检测方法，具体为利用液相质谱(HPLC-MS/MS)检测动物组织中亚精胺的含量。

背景技术

生物胺是生物体内一类分子质量较低，具有生物活性的含氮有机化合物的总称，广泛存在与水产品，肉类，乳制品和蔬菜中。亚精胺具有抗氧化，抗炎，改善线粒体代谢的功能，亚精胺也存在于人体中，与人类健康息息相关。适量的亚精胺有利于人体健康，但当其在动物和人体内积聚达到高水平或其摄入过量时会变得具有毒性，可能引起头痛，头晕心悸等症状，因此有必要对人体中的亚精胺含量进行有效检测和控制。

由于亚精胺结构中没有生色基团，既没有紫外吸收，也没有荧光及电化学活性，使其分离和测定都存在一定的困难。目前国内外应用有多种方法研究，目前常用的检测方法有：高效液相色谱(HPLC)、同位素标记等。

由于高效液相色谱具有分离效率高，分析速度快，检测灵敏度高等特点，许多应用中均使用高效液相色谱测定食品中的亚精胺含量，但是，高效液相色谱需要将目标物进行柱前柱后衍生之后才能进行检测，因此存在操作复杂，反应条件苛刻，质量控制相对较难等不足，更加不适用于作为动物组织中亚精胺含量的检测。液相质谱(HPLC-MS/MS)作为一种新型分离检测技术，与传统的液相色谱相比，具有灵敏度高，样品消耗少，分离速度快等优点。

因此，本发明旨在建立一种简单、快速的动物组织亚精胺检测方法。

发明内容

本发明基于上述不足之处，优化动物组织处理方法，优化色谱质谱条件，建立一种简单且快速的亚精胺检测方法，适用于动物组织中亚精胺的监测。

本发明采用的技术方案为：

本发明提供一种高效液相-质谱法检测亚精胺含量的方法，所述方法为：

(1)样品制备：将待测样品加入提取溶液中，研磨匀浆直至样品完全呈现匀浆状态，于20℃、20KHz超声提取15min，离心(优选12000转离心15min)，吸取上清，即为上样样品；所述提取溶液为体积比1:1的乙腈和水；所述提取溶液体积用量以待测样品重量计为5～10μL/mg；所述研磨是在磁珠作用下超声(优选65Hz，90s)进行，所述磁珠直径为2～3mm，所述磁珠加入量以提取溶液体积计为2～3颗/600μL；

(2)将步骤(1)上样样品进行高效液相-质谱检测，获得亚腈胺峰面积，然后根据亚腈胺标准曲线，获得待测样品中亚腈胺含量；

所述液相条件为：采用Agilent 1290Infinity Series和Triple Quadrupole6420from Agilent Technology(Santa Clara,CA,USA)；色谱柱：亲水作用色谱(HILIC)柱(100mm×2.1mm，5μm，MS Technologies)；流动相：乙腈-0.2％甲酸水(体积比为1：1，等度洗脱)；流速：0.5mL/min；进样量：3μL；柱温：30℃；扫描方式：电喷雾正离子(ESI+)扫描；检测方式：多反应检测(MRM)；Fragmentor电压：65～75V，CE电压：10～20eV。

进一步，所述待测样品包括：粪便、肝脏、肾脏、结肠、空肠、回肠、肌肉、脾脏、棕色脂肪或附睾脂肪。