[发明专利]一种诺卡氏菌免疫增强剂在禽用疫苗制备中的应用

说明书

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种诺卡氏菌免疫增强剂在禽用疫苗制备中的应用。所述免疫佐剂是利用诺卡氏菌经发酵罐培养，高压灭菌后进行提取而制得的。本发明通过将诺卡氏菌的培养物或者发酵物作为免疫佐剂，用于制备禽用疫苗，具有安全性高，疫苗注射无残留，可以显著提高动物的免疫力。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种诺卡氏菌免疫增强剂在禽用疫苗制备中的应用。

背景技术

免疫增强剂是指单独或同时与抗原使用均能增强机体免疫应答的物质，目前佐剂的品种较多，按其作用的先决条件可分为三类：⑴免疫替代剂，用来代替某些具有免疫增强作用的生物因子的药物；⑵免疫恢复剂，能增强被抑制的免疫功能，但对正常免疫功能作用不大；⑶免疫佐剂，又称非特异性刺激剂。常用的免疫增强剂有卡介苗、短小棒状杆菌、内毒素、免疫核糖核酸、胸腺肽、转移因子、双链聚核苷酸、氢氧化铝铝胶佐剂等。

上述佐剂中，有的虽然已经研究应用于人类如胸腺素，但价格较为昂贵，不可能用于动物。目前动物疫苗所用佐剂如氢氧化铝铝胶佐剂，通过延长疫苗在注射部位的停留时间发挥佐剂效应，还没有直接通过增强动物机体自身的免疫应答能力的佐剂来提高免疫效果，致使动物免疫效果较差，影响了畜禽养殖业的快速健康发展。因此，研发新型的免疫增强剂，改善动物免疫效果，成为畜禽养殖业亟待解决的问题之一。

诺卡氏菌是具有较强免疫活性的微生物，其主要结构中的诺卡式霉菌酸，可非特异性刺激细胞免疫功能，并且促进多种细胞因子分泌，其添加到禽用油乳剂灭活疫苗中可以明显促进疫苗诱导动物抗体的产生，并且抗体水平在球虫阳性场无明显下降。

中国专利申请CN108815198A公开了一种红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为巨噬细胞增殖促进剂的用途，所述红色诺卡氏菌为Nr-8206，在体外可以用于促进巨噬细胞增殖、促进巨噬细胞表面功能分子MHC-II、CD86、CD80或TLR4的表达、促进巨噬细胞胞内活性氧的产生、促进巨噬细胞TNF-α、IL-6、IL-12p40、IL-1β或IFN-β的表达、抑制巨噬细胞IL-10的表达、以及促进巨噬细胞杀伤卵巢癌细胞。但是，这种促进作用是针对特定的巨噬细胞，适用范围窄，且可选择的菌种范围也窄，且对动物的免疫效果无明显促进作用。

综上可知，现有技术中的免疫增强剂普遍存在免疫效果差，适用范围窄，促进作用不明显等缺点。

发明内容

为了克服现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种诺卡氏菌免疫增强剂在禽用疫苗制备中的应用。本发明提供的免疫佐剂是以诺卡氏菌为佐剂，制备成禽用油乳剂灭活疫苗，通过选择的抗原不同，制成的疫苗也不同。本发明提供的由免疫佐剂制成的疫苗免疫性强，制备过程简单，且根据选择的抗原不同，制成的灭活疫苗也不同，适用范围广，相对应的疫苗特异性强。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种诺卡氏菌免疫增强剂，利用诺卡氏菌制备，制备方法如下：

将诺卡氏菌置于30L的发酵罐中培养48小时，高温高压灭活，即得；

发酵罐中培养基的配方为葡萄糖2％、酵母粉1％、胰蛋白胨2％、纯化水95％，pH7.0-7.2；

在发酵罐中的培养条件为：搅拌转速310r/min，通气量1:1.0、接种量8％、装液量为罐容积的65％、温度30℃。

优选地，所述高温高压灭活的具体操作为121℃，101kPa，处理20min。

本发明还提供了一种所述诺卡氏菌免疫增强剂在制备禽用油乳剂灭活疫苗中的应用。

本发明还提供了一种所述禽用油乳剂灭活疫苗的制备方法，包括如下步骤：

S1、将诺卡氏菌佐剂进行定量，同时测定其类脂化合物、阿拉伯半乳糖及粘肽的含量，得定量的诺卡氏菌佐剂；