[发明专利]吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂的筛选方法

说明书

本发明涉及一种吲哚胺2，3‑二氧化酶抑制剂的筛选方法，包括以下步骤：标准品配制：配制色氨酸标准溶液和犬尿氨酸标准溶液；分别取标准品加入到细胞培养基中得到做标准曲线的标准溶液；RapidFire液质联用检测标准溶液样品的峰面积，采用标准溶液的浓度和相应的峰面积信号做标准曲线；将色氨酸与细胞加入细胞培养基中，并加入待筛选药物，孵育一段时间，加入乙腈或甲醇处理待测样品，待测样品经高速离心机离心，取上清液进行上机检测，根据所得标准曲线，计算样品中色氨酸和犬尿氨酸的浓度，进而判断待筛选药物是否为吲哚胺2，3‑二氧化酶抑制剂。与现有技术相比，本发明方法可提供在细胞水平内筛选IDO抑制剂药物的可靠和有效的方法。

技术领域

本发明涉及一种药物筛选方法，尤其是涉及一种吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂的筛选方法。

背景技术

吲哚胺2，3-二氧化酶(Indoleamine 2,3-dioxygenase，IDO)是色氨酸-犬尿氨酸途径的限速酶，它催化哺乳动物肝外组织必需氨基酸L-色氨酸生成犬尿氨酸。IDO抑制T淋巴细胞的增殖，使得恶性肿瘤细胞借此逃避免疫监视、导致肿瘤发生。IDO的抑制剂有望成为肿瘤治疗的手段。另外在同种异体间器官移植间，IDO的表达能够减弱T细胞介导的急性排斥反应，延长移植物存活时间。

发明内容

本发明的目的就是为了提供一种吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂的筛选方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

本发明提供一种吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂的筛选方法，包括以下步骤：

1)标准品配制：配制色氨酸标准溶液和犬尿氨酸标准溶液；

2)分别取标准品加入到细胞培养基中得到做标准曲线的标准溶液；

3)系列标准溶液加入乙腈或甲醇处理标准溶液样品，处理后标准溶液样品经高速离心机离心，标准溶液样品准备上机检测；

4)RapidFire液质联用检测标准溶液样品的峰面积，采用标准溶液的浓度和相应的峰面积信号做标准曲线；

5)将色氨酸与细胞加入细胞培养基中，并加入待筛选药物，孵育一段时间，加入乙腈或甲醇处理待测样品，待测样品经高速离心机离心，取上清液准备上机检测；

6)RapidFire液质联用检测待测样品的峰面积，根据步骤4)所得标准曲线，计算样品中色氨酸和犬尿氨酸的浓度，进而判断待筛选药物是否为吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂。

在本发明的一个实施方式中，步骤1)中，所述色氨酸标准溶液为一系列不同已知浓度的溶液；所述犬尿氨酸标准溶液为一系列不同已知浓度的溶液；

优选地，步骤1)中，色氨酸标准溶液和犬尿氨酸标准溶液的系列浓度为30,000、10,000、3,000、1,000、300、100、30、10、3μM。

在本发明的一个实施方式中，步骤1)中，配制色氨酸标准溶液和犬尿氨酸标准溶液的溶剂选择甲醇或乙腈或水中的一种或多种。

在本发明的一个实施方式中，步骤2)中，分别取标准品5μL加入到45μL细胞培养基中得到做标准曲线的标准溶液，浓度为3,000、1,000、300、100、30、10、3、1、0.3μM。

在本发明的一个实施方式中，步骤2)所述细胞培养基为DMEM(high glucose)培养基，选择市售的DMEM(high glucose)培养基，主要成分包括甘氨酸(Glycine)，精氨酸(Arginine)，氢氯酸盐(hyfrochloride)，胱氨酸(Cystine)，谷氨酰胺(glutamine)，组氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，赖氨酸盐酸盐，蛋氨酸，苯丙氨酸，丝氨酸，苏氨酸，色氨酸，酪氨酸，缬氨酸，氯化胆碱，泛酸钙，叶酸，烟酰胺，氯化钙，硫酸镁等。