[发明专利]一种用于单细胞扩增的脱落细胞固定方法

说明书

本发明公开了一种用于单细胞扩增的脱落细胞固定方法，包括以下步骤：离心处理：预先准备，接着将脱落细胞处理成细胞悬液，然后进行离心处理，得到细胞沉淀；加入PBS‑RI溶液：向得到的细胞沉淀中，轻柔加入0℃～8℃预冷的PBS‑RI溶液，并用宽口径枪头小心吹散细胞团。本发明通过设置离心处理、加入PBS‑RI溶液、细胞筛处理、制备细胞固定试剂和加入细胞固定试剂的工艺流程，解决了目前的脱落细胞固定方法多使用甲醛、戊二醛、多聚甲醛和乙醇，这些材料要么对人体有危害，要么存在固定效果短的问题，该用于单细胞扩增的脱落细胞固定方法，具备催化性能高、易与产物分离、可重复使用、使用方便、液体不挥发，对人体没有危害的优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体为一种用于单细胞扩增的脱落细胞固定方法。

背景技术

单细胞全基因组测序技术是在单细胞水平对全基因组进行扩增与测序的一项新技术。其原理是将分离的单个细胞的微量全基因组DNA进行扩增，获得高覆盖率的完整的基因组后进行高通量测序用于揭示细胞群体差异和细胞进化关系。

在单细胞扩增过程中脱落细胞固定是其中一个步骤，但是目前的脱落细胞固定方法多使用甲醛、戊二醛、多聚甲醛和乙醇，这些材料要么对人体有危害，要么存在固定效果短等确定，为此提出一种催化性能高、易与产物分离、易回收、可重复使用、使用方便、液体不挥发，对人体没有危害的脱落细胞固定方法来解决此问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于单细胞扩增的脱落细胞固定方法，具备催化性能高、易与产物分离、易回收、可重复使用、使用方便、液体不挥发，对人体没有危害的优点，解决了目前的脱落细胞固定方法多使用甲醛、戊二醛、多聚甲醛和乙醇，这些材料要么对人体有危害，要么存在固定效果短的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于单细胞扩增的脱落细胞固定方法，包括以下步骤：

步骤1：离心处理：预先准备，接着将脱落细胞处理成细胞悬液，然后进行离心处理，得到细胞沉淀；

步骤2：加入PBS-RI溶液：向得到的细胞沉淀中，轻柔加入0℃～8℃预冷的PBS-RI溶液，并用宽口径枪头小心吹散细胞团，以使细胞重悬；

步骤3：细胞筛处理：将与实验匹配直径的细胞筛放入50mL离心管中，将得到的重悬的细胞慢慢倒入到细胞筛上，细胞过滤入50mL的离心管，得到细胞悬液；

步骤4：制备细胞固定试剂：细胞固定试剂的有效成分为C₁₆H₂₈O₄N₃，按照C₁₆H₂₈O₄N₃与水的混合液的体积比为6％-20％混合制备出细胞固定试剂；

步骤5：加入细胞固定试剂：将制备好的细胞固定试剂与离心管中的细胞悬液按照体积分数比为10％-30％进行配比。

优选的，所述在步骤1中，离心处理的条件为：在500g，4℃离心3min，弃上清。

优选的，所述在步骤1中，预先准备包括收集脱落细胞和对PBS-RI溶液进行预冷，以及准备相关设备。

优选的，所述在步骤2中，PBS-RI溶液组成为：1xPBS+0.05U/μL RNase抑制剂。

优选的，所述在步骤2中，加入的PBS-RI溶液的量为1mL，温度为4℃。

优选的，所述在步骤4中，C₁₆H₂₈O₄N₃与水的混合液的优选体积分数比为10％。