[发明专利]一种长链非编码RNA lnc-PMIF及其小干扰RNA和应用

说明书

本发明公开了一种长链非编码RNA lnc‑PMIF，以及lnc‑PMIF的小干扰RNA。另外，本发明还公开了该长链非编码RNA lnc‑PMIF在制备或筛选诊断人骨骼系统疾病的产品中的应用，以及小干扰RNA在制备治疗人骨骼系统疾病药物或药物组合物中的应用。本发明通过设计小干扰RNA序列，验证lnc‑PMIF的功能，证明lnc‑PMIF可以通过HuR抑制成骨细胞迁移，lnc‑PMIF序列可用于骨骼系统疾病的诊断或作为治疗靶点；设计的小干扰RNA序列可用于制备治疗骨骼系统疾病的药物及药物组合物，包括人骨质疏松、股骨头坏死、关节退行性变、脊柱侧弯以及其它骨骼系统疾病。

技术领域

本发明属于分子生物学及医学技术领域，具体涉及一种长链非编码RNA lnc-PMIF及其小干扰RNA和应用。

背景技术

非编码RNA(Non-coding RNA)是指不编码蛋白质的RNA。其中包括microRNA(miRNA)和长链非编码RNA(long non-coding RNA,简称lncRNA)等。这些RNA的共同特点是都能从基因组上转录，但是不编码蛋白，在RNA水平上行使各自的生物学功能。其中lncRNA是一种长大于200nt的真核内源型RNA，广泛分布于真核生物体内，在细胞分化、器官发育和疾病发生等多种生理和病理过程中起重要的调控作用。而成骨细胞是骨形成的主要功能细胞。随着人年龄的增长，骨的发育也发生着动态的变化，其中由成骨细胞引导的骨形成和由破骨细胞引导的骨吸收构成了骨重建的动态平衡。当成骨细胞分化异常时，会导致相应骨代谢疾病的发生，如骨质增生、骨质疏松、股骨头坏死、关节退行性变、脊柱侧弯等。

1ncRNA可在细胞分化，个体发育和疾病中发挥重要作用，如lnc-DC可以调控神经树突状细胞分化，lncRNA-DIGIT可以调控胚胎内胚层形成，lncRNA-CLMAT1可以诱导结直肠癌肝转移等；这些研究主要集中于神经、发育、肿瘤等领域，有关lncRNA参与骨质疏松症等骨代谢疾病的研究报道较少。

纽约大学西奈山医学院的DF Lee等人在李-佛美尼综合症(LFS)患者iPSC来源的成骨细胞中，发现lncRNA H19的表达降低，经进一步分析发现，在恢复成骨细胞中H19的表达后，能促进成骨细胞的分化，同时抑制骨肉瘤的成瘤能力。提示了lncRNA可以对成骨细胞分化发挥作用，也说明可以利用lncRNA来作为治疗骨质疏松等骨骼系统疾病的药物。但该研究仅局限于李-佛美尼综合症患者iPSC来源的成骨细胞中，未做对于正常非病理现象(如衰老，绝经，长期卧床等)情况下的成骨细胞研究(Lee DF,et al.Modeling familialcancer with induced pluripotent stem cells,Cell.2015Apr 9；161(2):240-254)。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种长链非编码RNA lnc-PMIF。本发明通过lncRNA高通量测序、cDNA末端快速扩增技术(rapidamplification of cDNA ends，RACE)和克隆测序，发现和鉴定了一条lncRNA，命名为lnc-PMIF，设计lnc-PMIF的引物，检测lnc-PMIF在老龄小鼠骨质疏松模型、去卵巢骨质疏松小鼠模型骨组织中的表达，证明其表达与骨质疏松症的发生具有相关性。再通过设计小干扰RNA序列验证lnc-PMIF的功能，证明lnc-PMIF可以通过HuR抑制成骨细胞迁移。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种长链非编码RNA lnc-PMIF，其特征在于，所述长链非编码RNA的cDNA序列如SEQ ID NO：1所示，或者所述长链非编码RNA的cDNA的序列为与SEQ ID NO：1所示序列完全互补等长的核苷酸序列。

上述的一种长链非编码RNA lnc-PMIF，其特征在于，用于检测所述长链非编码RNA的引物序列如下：

lnc-PMIF-1-Forward，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2；