[发明专利]能够特异性结合MPO的结合蛋白、其用途、试剂、试剂盒和检测MPO的方法

说明书

本发明公开了一种能够特异性结合MPO的结合蛋白、其用途、试剂、试剂盒和检测MPO的方法，涉及抗体技术领域，本发明公开的结合蛋白包括抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包括如下互补决定区中的至少一个：CDR‑VH1、CDR‑VH2、CDR‑VH3、CDR‑VL1、CDR‑VL2和CDR‑VL3。本发明提供的结合蛋白可以特异性结合MPO，具有较好的结合活性和亲和力，可用于MPO的检测，提高检测特异性和灵敏度。

技术领域

本发明涉及抗体技术领域，具体而言，涉及一种能够特异性结合MPO的结合蛋白、其用途、试剂、试剂盒和检测MPO的方法。

背景技术

髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)是由中性粒细胞、单核细胞和某些巨噬细胞分泌的一种含血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶超家族成员之一。相对分子质量为150KD，由2个亚单位通过二硫键聚合而成，每个亚单位又由一条重链和一条轻链组成。纯化的人MPO活性为25～351U/mg，水溶性好，反应最适pH为4.5～5.5， pH≥10或≤2时，失活。MPO在髓系细胞中以MPOⅠ、Ⅱ和Ⅲ3种亚型存在。这3种亚型的重链有所差异，功能上的差异尚不明确，有待继续研究。

MPO是中性粒细胞的功能标志和激活标志。MPO在宿主对抗微生物入侵早期免疫系统激活机制中起重要作用。其不仅能在吞噬细胞内杀灭微生物，而且可释放到细胞外，破坏多种靶物质，如肿瘤细胞、血小板、NK细胞、原虫和毒素等，其还对机体产生和调节炎症反应等方面发挥作用。在中心粒细胞活化后被释放出来，MPO形成多种氧自由基形式，氧化低密度脂蛋白和降低NO的生物利用度来促进动脉粥样硬化斑块形成。因此，循环中MPO水平升高可能预示炎症的发生。

冠心病是心血管系统中常见的疾病，而动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是形成冠心病的重要基础。MPO通过产生自由基和多种反应性物质，促进斑块形成和不稳定性增加，加速AS病变形成，进而引发并发症如急性冠脉综合征(Acute Coronary Syndrome，ACS)。在急性冠脉综合征复杂的病理生理过程中，炎症相关生物标志物中超敏C反应蛋白(Hypersensitive C-reactive protein，Hs-CRP)是最具代表性的指标，然而，Hs-CRP在其他因素导致的感染、炎症中也会升高，诊断特异性差，容易出现误诊。

目前，心肌损伤标志物肌钙蛋白Ⅰ(Cardiac TroponinⅠ，cTnⅠ)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)及纤维蛋白原(Fibrinogen，Fib)等是临床常用来评价病情的指标。相对于肌cTnⅠ、CK-MB及Hs-CRP在患者出现症状后开始升高，而MPO在冠状动脉炎症反应和心脏时间发生前即可对ACS做出评估的生物学标志物。

MPO对ACS的诊断尤其是对急性心肌梗死的诊断具有一定价值。大量的研究表明：急性心梗患者的血浆MPO的表达显著高于不稳定心绞痛患者和正常人，而MPO缺陷的个体，罹患心血管疾病的危险性明显下降。血清MPO水平与冠脉病变严重程度呈正相关，反映冠脉炎症活动性状况。因此，MPO水平的升高不仅与患冠状动脉疾病易感性相关，还可以预测早期患心肌梗死的危险性。

有试验证实：MPO在ACS中的早期诊断价值，在患者出现症状1h内既有诊断价值，而此时cTnⅠ、CK-MB还处于基线水平。MPO可作为一种新的预测ACS的炎症标志物，能识别cTnⅠ阴性的ACS患者未来发生不良心血管事件的危险性。最近的研究证实，MPO结合超敏C反应蛋白检测大大提高了对冠脉验证反应和远期预后的诊断价值。此外，MPO对于心肌重构有一定作用，因此它也可能是潜在的心衰标志物。

MPO可作为冠心病的预测因子和急性冠脉综合征预后判断指标：MPO升高提示患者存在冠状动脉炎症、斑块不稳定，所以MPO可早期识别不稳定斑块，是ACS早期诊断的炎症标记物之一。