[发明专利]单一因素快速诱导酒精性脂肪肝模型的方法

说明书

本发明公开了一种单一因素快速诱导酒精性脂肪肝模型的方法，该方法每天按体重4‑5.7g/kg的乙醇量，给非人灵长类动物饮用含10‑35％乙醇的酒，同时给予基础饲料自由喂养，喂养50‑90天，即可得到稳定的酒精性脂肪肝模型。本发明能获得稳定的接近于人类自然发生的酒精性脂肪肝动物模型，非人灵长类动物依从性较好，试验中无须手术或处死动物检查，且造模时间短、成本低，为酒精性脂肪肝发病机理的研究、治疗药物的筛选、药效学评价等提供良好的模型载体。

技术领域

本发明涉及一种动物疾病模型的建立方法，特别是涉及一种单一因素快速诱导酒精性脂肪肝模型的方法。

背景技术

酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver disease,AFLD)是脂肪肝病的一个分型,是临床肝病中较为特殊的一种,发病者多为长期饮酒者，一般超过5年，并因为长期、大量饮酒导致肝细胞产生大量毒性物质如乙醛，分泌大量自由基、羟基，进而引发代谢紊乱。近年来随着生活方式的转变，酒精和或代谢因素诱导的肝病以及相关性疾病迅速增加，脂肪肝的发病率逐年上升且呈年轻化的态势，我国的脂肪肝在肝病中上升到了第二位。在长期过量饮酒的人群中，酒精性脂肪肝者约占90-100％，酒精性肝炎者为10-35％，最终发展为酒精性肝硬化者8-20％。现有研究发现，非酒精性肝硬化患者5-10年存活率为23％，而酒精性肝硬化患者存活率仅为7％。酒精性肝炎患者，每年发展成肝硬化者占10-20％，最终发展为肝癌约占70％，应引起高度重视。为深入研究酒精性脂肪肝的发病机制，寻找有效的预防治疗药物，需要建立一个与人类相似、操作简单而又稳定的动物模型。

目前，传统的酒精性脂肪肝模型常以大小鼠作为实验对象，采用酒精或酒，灌胃或腹腔注射酒精，实验周期约为1～16周。如汪海慧等大鼠给予8ml/kg酒灌胃，2次/天，连续5天后，病理可见大鼠肝细胞质内有大小不一的脂滴空泡。罗华丽等采用56度红星二锅头酒按10ml/kg比例灌胃，上下午各1次，连续灌胃8周以建立大鼠酒精性脂肪肝模型。罗华丽等还采用乙醇混合含高脂配方的脂肪乳剂(猪油25g，胆固醇lOg，丙硫氧嘧啶1g，吐温20ml，50％乙醇)按15ml/kg灌胃，连续4周。结果表明，模型组大鼠肝组织脂肪变性明显，血清ALT,AST、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)均明显升高。上述传统的酒精性脂肪肝模型方法简单易行，建模周期短，成本低，但工作较繁琐，动物死亡率高，采用灌胃操作，不符合人类的饮酒习惯。

非人灵长类动物与人类基因同源性高，免疫反应与人相似，在所有动物中生理生化指标与人类最为相似，近年来也有采用非人灵长类动物建立酒精性脂肪肝动物模型。如申请号为201010200583.4的中国发明专利，发明名称为“猕猴肝损伤动物模型构建方法”，该发明用猕猴为模型动物,以无水乙醇兑制纯净水,供猕猴饮用,浓度以5％/周递增,至20％后持续20～30周,并饲喂维持期饲料，即得酒精性脂肪肝动物模型。如申请号为201610793182.1的中国发明专利，发明名称为“一种食蟹猴酒精性肝病模型的构建方法”，采用阿斯巴甜饮用水，每周增加10％的酒精让其自由饮用，筛选出试验动物，用10％蔗糖代替酒精中的阿斯巴甜，继续喂养30％酒精及在基础饲料中额外添加20％的猪板油，第12周末，即得酒精性脂肪肝动物模型。上述方法中均有使用非人正常饮用的酒精，且采用了的阿斯巴甜、蔗糖、猪板油等高糖高脂饲料，成模时间84至238天，存在成模周期长、操作较复杂等诸多缺点，限制了其在酒精性脂肪肝发病机理的研究、预防或治疗酒精性脂肪肝药物的筛选、药效学评价等方面的应用。

发明内容

本发明针对上述酒精性脂肪肝模型存在的不足，尤其是采用与人相似的单一因素酒诱导的酒精性脂肪肝病模型的不足，本发明提供一种采用酒单一因素快速诱导非人灵长类动物酒精性脂肪肝模型的方法，该方法以非人灵长类动物为对象，通过酒单一因素诱导,获得B超及病理检测结果均显著的能够完全模拟人酒精性脂肪肝发生发展的动物模型，为酒精性脂肪肝发病机理的研究、预防或治疗药物的筛选、药效学评价等提供良好的模型载体。

本发明是通过以下技术方案实现的：