[发明专利]糖皮质激素内分泌干扰联合效应的转基因细胞测定法

权利要求书

1.一种糖皮质激素内分泌干扰联合效应的转基因细胞株，其特征在于，选用Hela细胞，转染带有绿色荧光蛋白标签的糖皮质激素受体，通过抗生素筛选，获得稳定转染GFP-GR的Hela细胞株，其通过同时用三个质粒：含有tTK基因的pTet-GFP-GR、含有GFP-GR的pTet-tTAK以及含有neo抗性基因的pSV2neo共同转染Hela细胞获得；

其中pTet-GFP-GR和pTet-tTAK两个质粒均受tet启动子控制；pSV2neo则用于提供neo抗性基因，便于通过G418抗生素筛选稳定细胞株；其中，质粒pTet-GFP-GR是由pTet-splice和GFP-GR全基因重组而成。

2.如权利要求1所述这的糖皮质激素内分泌干扰联合效应的转基因细胞株，其特征在于，所述转染Hela细胞包括以下步骤：

S1：质粒pTet-GFP-GR、pTet-tTAK和pSV2-neo分别通过热激法转化入大肠杆菌感受态细胞，涂布含有氨苄青霉素的LB平板进行培养后，分别挑取单克隆菌株；再经含氨苄青霉素的LB液体培养基培养后，抽提质粒并进行测序；

S2：将测序正确的三个质粒分别进行线性化和纯化；

S3：纯化后的质粒按pTet-GFP-GR、pTet-tTAK和pSV2-neo混合后，利用脂质体介导法转染Hela细胞，通过抗生素G418及tet筛选稳定表达绿色荧光蛋白信号的转基因细胞。

3.如权利要求2所述的糖皮质激素内分泌干扰联合效应的转基因细胞株，其特征在于，所述S3步骤中， pTet-GFP-GR：pTet-tTAK：pSV2-neo按质量比为10：10：1混合。

4.如权利要求2所述的糖皮质激素内分泌干扰联合效应的转基因细胞株，其特征在于，所述S3步骤中，脂质体介导法转染Hela细胞之前还包括以下步骤：利用G418抗生素对所述Hela细胞进行浓度筛选，并于37℃、5% CO₂条件下培养14d，以获得导致细胞全部死亡的最小浓度；

导致细胞全部死亡的G418最小浓度为800μg/mL。

5.如权利要求2所述的糖皮质激素内分泌干扰联合效应的转基因细胞株，其特征在于，所述S3步骤中，Hela细胞按10⁵个/平板接种至60cm平板中，待生长至汇合率80%左右即可用于转染实验。

6.一种如权利要求1至5任一项所述的转基因细胞株在检测糖皮质素EDCs残留中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用的检测样本来自于监测污水、乳粉或其制品中的任意一种。

8.如权利要求6或7所述的应用，其特征在于，当需要检测时，更换无tet处理过的血清培养基培养所述转基因细胞株，将样品添加至培养基中以培养前述的转基因细胞株，再通过测定GFP荧光值所反映的质核迁移比率作为结果进行判定。