[发明专利]用于肿瘤检测的高分子生物传感器及制备方法及应用

权利要求书

1.用于肿瘤检测的高分子生物传感器，其特征在于：所述的高分子生物传感器采用单体聚合得到，聚合物具有式Ⅴ所示的结构：

其中R为烷基，烷基为丁基或己基或辛基或十一烷基或十三烷基，n的大小为10-20。

2.用于肿瘤检测的高分子生物传感器制备方法，其特征在于：所述的制备方法包括单体制备和单体聚合反应，单体的路线如下：

单体聚合反应如下：

上述各式中，其中R为烷基，烷基为丁基或己基或辛基或十一烷基或十三烷基，n的大小为10-20；具体步骤包括以下：

A：单体制备：

A1: 采用式Ⅰ制备式Ⅱ

将正丁基锂溶液注入置于冰浴中的式Ⅰ所示的碘代1,4-二甲基苯并的无水四氢呋喃溶液中，搅拌1小时后加入酮，所述的酮为2-己酮 或2-辛酮 或2-癸酮或 2-十三烷酮或 2-十五烷酮，将反应升温至室温，并在氮气下搅拌12小时以上，然后用水将反应物淬灭，并继续搅拌30分钟，采用二氯甲烷萃取反应混合物，并用去离子水洗涤三次，收集有机层，减压去除溶剂，然后将产物真空干燥1h，得到淡黄色油状液体，用正己烷洗脱硅胶柱层析进一步纯化，得到式Ⅱ所示的产物；

A2：采用式Ⅱ制备式Ⅲ

将步骤A1得到的产物式Ⅱ置入烧瓶中，加入二氯甲烷作为溶剂，并在氮气下搅拌30分钟，

将三氟化硼乙醚添加到烧瓶中，反应在氮气下60℃搅拌12小时，然后，用甲醇淬火并在氮气下搅拌20分钟，在减压下除去溶剂，向反应混合物中加入冷甲醇，放入冰箱中1小时，收集沉降在烧瓶底部的油状液体，最终得到式Ⅲ所示的产物；

A3：采用式Ⅲ制备式Ⅳ

将步骤A2得到的产物式Ⅲ置入烧瓶中，加入四氯化碳、N-溴代琥珀酰亚胺和过氧化苯甲酰，在70℃下加热并在氮气下搅拌反应4小时，将反应混合物冷却至室温并过滤，向滤液中加入含水Na2SO3，然后，将滤液搅拌；用100ml去离子水洗涤反应混合物三次，通过减压除溶剂去，用正己烷洗脱硅胶柱层析进一步纯化化合物得到式Ⅳ所示的产物单体；

B：聚合反应：

将步骤A3的得到的式Ⅳ所示的单体以四氢呋喃作为溶剂在室温下进行聚合反应，反应时间12小时，得到式Ⅴ所示的聚合物。

3.用于肿瘤检测的高分子生物传感器的应用，所述的高分子生物传感器采用权利要求1所述的聚合物，其特征在于：所述的高分子生物传感器用于检测肿瘤细胞过氧化物。

4.根据权利要求3所述的用于肿瘤检测的高分子生物传感器的应用，其特征在于：所述的高分子生物传感器用于检测肿瘤细胞过氧化物的步骤如下：

步骤1：在超净实验台上，将聚合物3mg均匀涂布到透明石英载玻片表面，在氮气保护下放置于80℃烘箱中24小时；待聚合物固化后，涂层以薄膜的形式均匀分散于载玻片，放置于0.1M PBS pH=7.4的缓冲液中室温密闭保存24h；使用前，将待使用的高分子涂层载玻片用去离子水清洗3次，置于37℃ 烘箱中静置6h；

步骤2：细胞样品的制备：

在超净实验台上，实验室培养各种肿瘤细胞样本，取各种肿瘤细胞100μL，加入1.5mL离心管中, 加入1mL 0.1M PBS pH=7.4缓冲液，于37℃条件下震荡预孵3分钟；在4℃下静置30min，细胞破碎后离心，用高速冷冻离心机在4℃，20 ,000× g的条件下，高速离心30分钟后，取上清液为测试样品；将每种上清液与活性炭0.1g充分震荡10min后，通过0.2μL的过滤网，取滤液，进行电泳检测，电泳检测具体为：将玻璃板凝胶放入电泳槽中，并在糟中加入1X电泳缓冲液，取所制备样品上清20ul，蛋白Maker 5 ul分别上样，设定电泳程序：S1-80V-35min；S2-160V-1h，证明滤液中不含有蛋白及核酸杂质后作为测定样品；

步骤3：检测：

在氮气保护的氛围下，将步骤1得到的涂有高分子涂层石英载玻片放到表面皿中，将步骤2制备好的肿瘤细胞提取液加入表面皿中，将表面皿静置一定时间，拿出载玻片，用去离子水50mL水充分清洗表面2次；常温下烘干后，对载玻片进行荧光检测。